小刺猴头菌[Hericium caput-medusae (Bull.:Fr.)Pers.]化学成分研究及菌种鉴定

来源 :吉林农业大学 | 被引量 : 10次 | 上传用户:lumuming
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本论文对小刺猴头菌的化学成分及菌种鉴定方法进行了比较系统的研究。小刺猴头菌[Hericium caput-medusae(Bull.: Fr.)Pers.]是猴头菌属(Hericium)中的一个种,是长白山自然保护区特有的菌物资源。国内外研究结果表明,猴头菌属菌营养丰富,含有多种活性物质,其中研究最多的、最引起人们注意的是多糖物质,而其他化学成分的研究国内开展的很少,国外主要是日本近几年进行了一些化学成分及药理学研究,发现了许多重要的药效成分。菌种鉴定方面,还没有见到从分子水平上采用分子生物学方法进行鉴定的报道。 本论文采用溶剂提取法从小刺猴头菌(Hericium caput-medusae)子实体中提取除蛋白质、核酸、多糖等生物大分子之外的有机小分子化学成分,得到四层提取浓缩液,第一层和第二层化学成分种类较第三层、第四层化学成分多,含有生物碱、酚类化合物、皂苷、萜类、含氧杂环及挥发油、油脂类等多种成分,但黄酮类物质显色不明显,以非极性化学成分为主;第三层和第四层中碳水化合物显色突出,但第四层与以上各层样品不同,在非极性溶剂及极性溶剂中溶解度均较差。 通过系统溶剂分离法、两相溶剂萃取法、结晶法和层析法分离纯化各层样品,得到石油醚相、氯仿相、水溶液相和部分结晶。石油醚相部分化学成分采用GC/MS联机法分析,分离鉴定出18种脂肪酸及其衍生物,绝大多数为脂肪酸酯类化合物,其中十八碳烷烃链化合物占多数,达7种之多,相对含量40.44%。在这些十八碳烷烃链化合物中,生物体内常见的硬脂酸、油酸、亚油酸、亚麻酸都有,多以乙酯或甲酯的形式存在,并且是主要成分。在十六种已知结构的化合物中,除亚油酸、棕榈酸酯外,其余成分均为在小刺猴头菌子实体中首次报道。10-十八碳炔酸酯是小刺猴头菌子实体石油醚相中的一个重要成分,相对含量高达14.31%,它与小刺猴头菌的药理活性之间有何种联系,还需在今后的药理学实验吉林农业大学博士学位论文猴头菌化学成分研究及菌种筛选中进一步研究确定。 检出两种邻苯二甲酸酷化合物,这是一种生产量大,人工合成的有机化合物,用于塑料生产的增塑剂,被国内外环境监测部门列为优先控制污染物,小刺猴头菌子实体中含有此类化合物,可能为环境污染所致。 从得到几十种结晶中选取20号结晶、36号结晶、26号结晶、l号结晶、33号结晶进行结构分析鉴定,经紫外光谱、红外光谱、核磁共振谱、质谱、元素分析、气相色谱、高效液相色谱、薄层色谱等分析鉴定方法分析,20号结晶、36号结晶、26号结晶为赤醉糖醉、葡萄糖醉、木糖醉等糖醇类化合物,为首次从小刺猴头菌中提出。1号结晶,33号结晶经上述方法分析鉴定,与文献资料比较,推测为二菇类化合物,详细结构正在进一步分析鉴定中。 为今后筛选高效猴头菌属菌种,本论文从分子水平探讨了猴头菌属菌种的鉴定方法。从长白山地区采集、收集猴头菌属菌株共六种(包括一种栽培生产菌株和一种药用发酵菌株),首先采用子实体组织分离法分离培养菌丝,然后通过实际栽培,将斜面上分离出的菌丝通过人工培养长出子实体进行复原鉴定。最后采用随机引物扩增多态性(Randoo Ampl 5 fi ed Polymorphi。DNA,RAPD)标记,检测各菌株基因组DNA在这些区域的多态性。选出十二种引物: A13(CAGCACCCAC),E04(GTGACATGCC),E07(AGATGCAGCC), E14(TGCGGCTGAG),B06(TGCTCTGCCC),B07(GGTGACGCAG), B08(GTCCACACGG),B10(CTGCTGGGAC),D03(GTCGCCGTCA), D07(TT弱CACGGG),E03(CCAGATGCAC),E15(ACGCACAACC)。PCR扩增结果,一显示出了不用菌种间DNA.扩增图谱的多态性,差异显著,具有明显的特征性条带,且条带的大小适中,其中引物B08、E03、A13、E04和E15能较好地区分小刺猴头菌和猴头菌,表明这些引物可作为鉴定猴头菌属菌种的RAPD标记引物。采用聚类分析法得到树系图。从树系图中可以看出,菌株TH一3和菌株TH一6亲缘关系最近,其次菌株TH一2和菌株TH一5,菌株TH一1有一定的亲缘关系,而吉林农业大学博士学位论文猴头菌化学成分研究及苗种筛选菌株TH一4与其他五个菌株亲缘关系最远。菌株HT-2、菌株HT-5及菌株HT-1子实体形态学观察为猴头菌;菌株HT-3和菌株HT-6,以及菌株HT-4子实体形态学观察为小刺猴头菌,RAPD鉴定结果与子实体形态学观察结果基本一致。
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