我国是世界蚕业的发源地，栽桑养蚕、缫丝织绸已有5000多年的历史。目前我国丝绸工业年总产值达1350亿元，茧丝产量和出口量分别占世界总额的70％和80％以上，蚕丝业是我国少数几个既能主导国际市场、又有自主知识产权、极具中华民族特色的优势传统产业。 家蚕氟化物耐受性是很重要的一项经济性状。氟化物是磷肥厂、砖瓦厂、玻璃厂、水泥厂等排出的有害气体，氟化物对蚕的危害主要是通过桑叶吸收以及吸附氟化物后，蚕儿食下污染桑叶而引起的。桑叶积累的氟化物越多，蚕食下后的毒害就越大。当桑叶中含氟量达到30～50mg/kg(mg/kg)时，氟化物将在蚕体内积累，出现慢性中毒症状；当桑叶中含氟量达到90～120 mg/kg时3～4龄蚕有58～99％死亡；150mg/kg以上时各龄蚕大都在食下2～3天后死亡。 自20世纪80年代以来，随着中国经济的持续高速发展，尤其是乡镇工业的不断发展，大气氟化物污染越来越严重，蚕儿食下受污染的桑叶而中毒的事件时有发生，给蚕业生产带来很大危害。据报道1986年浙江省湖州市因氟化物污染危害，受害面积达73％，减收春茧2900吨。嘉兴市受害面积达45％，损失春茧约3万担。1995年江苏省淮阴县、沭阳县因氟化物危害减收300多万元，以致于我国老蚕区浙江、江苏等经济发达地区，为了稳定蚕茧生产在春季改饲夏秋蚕品种。如今氟化物污染地区已扩大到江苏、浙江、广东、山东、重庆、广西等省市。为此，不少学者就氟化物对蚕的影响进行了广泛研究。中国农业科学院蚕业研究所在调查300多个家蚕资源品种的耐氟性基础上，首次发现了阈值为200mg/kg的耐氟显性主效基因。 本研究利用SSR分子标记及形态标记对耐氟显性主效基因(Def)进行了分子标记连锁及定位分析，并用形态标记对Def基因的连锁关系进行了验证。 1.分子标记连锁及定位分析 所用的亲本为中国农业科学院蚕业研究所保存的耐氟显性主效基因载体品种T6和氟化物敏感品种733新，利用T6和733新近交系组配正反交群体(733新×T6)×733新和733新×(733新×T6)，分别记作BC1F和BC1M，利用已经构建的家蚕SSR分子连锁图谱，对耐氟显性主效基因(Def)进行了分子标记连锁及定位分析。 1.1 用BC1F群体对Def基因进行连锁分析 用28条连锁群上已知的SSR标记在亲本733新和F1（733新×T6）之间做多态性分析，筛选多态标记。再用筛选到的多态性标记在BC1F群中做基因型分析，寻找与Def基因连锁的标记。结果在第12连锁群上筛选出3个与Def基因连锁的SSR标记（S1202,S1214和S1215）。为了增加标记密度，在第12连锁群上的其它17个已经定位的没有多态性的SSR标记附近设计引物，寻找与Def基因连锁的新的SSR标记。结果在S1212附近找到了一个与Def基因连锁的新标记，新标记编号为S1212-01。 这4个标记在BC1F群中的所有耐氟个体表现出与（733新×T6）F1相同的杂合型带型；而所有的敏感个体表现出与亲本733新一致的纯合带型，说明这些标记与Def基因连锁，家蚕的耐氟性是由单个显性主基因控制的，且Def基因位于12染色体上。 1.2 利用BC1M群体构建了Def基因的遗传连锁图 用筛选和获得的4个与Def基因连锁的SSR标记，在BC1M群体中做PCR扩增,通过计算条带的交换率对Def基因进行定位分析，构建了Def基因的遗传连锁图，遗传图距离为39.7cM，Def基因位于35.3cM处。在第12染色体上的SSR标记与Def基因的排列次序为：S1202，S1212-01,Def，S1214和S1215。 2. Def基因的形态标记验证 本实验用中国农业科学院蚕业研究所保存的T6和多星纹品种g02作为亲本。T6为耐氟显性主效基因载体品种，g02为氟化物敏感且携带家蚕第12染色体上多星纹基因ms的品种。用T6和g02杂交,组配F1代(g02×T6)和回交群体(g02×T6)×g02和g02×(g02×T6),分别记作F1、BC1F和BC1M。F1代及BC1回交群体从蚁蚕到5龄，添食用200 mg/kg NaF，调查统计后代性状分离比，分析ms基因与对 Def基因是否连锁。结果Def基因和多星纹基因ms在后代表型分离比例符合孟德尔的连锁遗传规律和自由组合规律，证明家蚕的Def基因位于家蚕第12染色体与多星纹基因ms连锁，为进一步用形态标记对Def基因定位奠定了基础。同时根据形态标记遗传连锁图，用经典遗传学的方法证实了分子标记的可靠性。