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目的： 筛查碳青霉烯类抗生素耐药或敏感性下降的肠杆菌科的细菌，并对其进行有关耐药基因的检测；了解近几年产OXA-48肠杆菌科细菌在温州地区的分布情况；分析blaOXA-48基因在菌株间的转移机制。 方法： 1.采用VITEK-2全自动微生物分析仪对2013年1月至2016年12月间分离于我院的碳青霉烯类抗生素（美罗培南、亚胺培南或厄他培南）耐药或敏感性下降的肠杆菌科细菌进行菌种鉴定和药敏试验。 2.携带blaOXA-48菌株的检测：通过PCR扩增并测序筛查菌株中blaOXA-48基因，确定携带blaOXA-48菌株。 3.携带blaOXA-48菌株表型确证试验：通过改良Hodge试验检测是否存在碳青霉烯酶； 4.其他β-内酰胺酶基因检测：通过 PCR扩增和 DNA测序对上述携带blaOXA-48的菌株进行其他碳青霉烯酶、超广谱β-内酰胺(ESBLs)酶及质粒介导的AmpC酶基因的检测。 5.耐药基因水平转移研究：通过接合、转化试验和PCR扩增分析，验证blaOXA-48基因是否位于质粒上，是否为可接合转移。挑选来自肺炎克雷伯菌Kp38_wz和大肠埃希菌Ec4676_wz接合子的质粒（分别命名为pOXA48_wz和pOXA48_wz1）进行质粒全基因组测序。 6.携带blaOXA-48菌株的分子特征研究：运用多位点序列分型(MLST)分析blaOXA-48阳性菌株的序列型；运用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析携带blaOXA-48菌株在同种菌种中是否为同一克隆型的传播。 结果： 1.菌株筛选和药敏结果：从245株碳青霉烯类抗生素耐药或敏感性下降的肠杆菌科菌株中分离到2株肺炎克雷伯菌和3株大肠埃希菌携带blaOXA-48，且这些菌株都来自同一病人，该病人从意大利一家医院接受外科手术后回到温州。这些细菌对β-内酰胺类抗生素呈中介或耐药水平，对三代头孢他啶、四代头孢菌素（头孢吡肟）、氨曲南和其他抗菌药物如阿米卡星、妥布霉素、庆大霉素、环丙沙星、左氧氟沙星和复方新诺明敏感。 2.碳青霉烯酶表型检测：2株肺炎克雷伯菌和3株大肠埃希菌改良Hodge试验结果均为阳性。 3.耐药基因检测：经PCR扩增测序，2株肺炎克雷伯菌和3株大肠埃希菌除blaOXA-48基因阳性外，未检测其他碳青霉烯酶、超广谱β-内酰胺(ESBLs)酶及质粒介导的AmpC酶基因。 4. MLST分型和PFGE分析：经PCR扩增和DNA测序，并与MLST数据库进行比对分析，发现2株肺炎克雷伯菌均为ST37，3株大肠埃希菌均为ST69。PFGE结果发现2株肺炎克雷伯菌为同一克隆型，3株大肠埃希菌也为同一克隆型。 5.接合和转化试验：2株肺炎克雷伯菌和3株大肠埃希菌的携带blaOXA-48耐药质粒均能通过接合试验成功地转移至受体菌大肠埃希菌EC600中。同时将2株肺炎克雷伯菌和3株大肠埃希菌的携带blaOXA-48的耐药质粒通过转化试验转移至大肠埃希菌 DH-5α中。挑选来自于肺炎克雷伯菌 Kp38_wz和大肠埃希菌Ec4676_wz接合子的质粒（分别命名为pOXA48_wz和pOXA48_wz1）进行质粒全基因组测序。 6.质粒序列分析：Kp38_wz携带3种耐药基因，即blaOXA-48、blaSHV-11和dfrA14，而Ec4676_wz中只有一种耐药基因blaOXA-48。pOXA48_wz和pOXA48_wz1均属于IncL/M型质粒，并且几乎完全相同。两个质粒的唯一区别是pOXA48_wz1在nt19099处缺少一个鸟嘌呤G。pOXA48_wz和pOXA48_wz1与其他携带blaoxa-48的IncL/M型质粒同源性较高，如pOXA-48a和pKPoxa-48N1。 结论： 1.首次在温州地区发现blaOXA-48基因，该基因位于可接合转移的IncL/M型质粒上。 2.在同一患者中同时分离出携带blaOXA-48的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌，可能是blaOXA-48基因在患者体内两种菌之间发生转移。 3.携带blaOXA-48的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌可能是患者从blaOXA-48高流行区欧洲携带入中国。