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[目 的]探讨骨保护素(Osteoprotegerin,OPG)、核因子-κB受体活化因子(Receptor activator of NF-κB,RANK)与其唯一配体即核因子-κB受体活化因子配体(Receptor activator of NF-κB Ligand,RANKL)在颌骨骨肉瘤组织的表达情况,分析OPG/RANKL/RANK信号轴在颌骨骨肉瘤发生发展中的作用以及其与颌骨骨肉瘤转移的关联性,以期为颌骨骨肉瘤的临床治疗提供参考和借鉴。[方 法](1)标本收集:选取术后经病理检查明确诊断为颌骨骨肉瘤石蜡包埋标本32例(其中发生转移11例,未发生转移21例)以及牙源性角化囊肿石蜡包埋标本10例(牙源性角化囊肿可造成颌骨骨质明显损坏,并呈浸润性生长的生物学行为,具有显著的复发性和癌变能力,因而其与一般的颌骨囊肿相比有一定的特殊性,故选取其作为对照组)。(2)实验分组:对纳入的实验组颌骨骨肉瘤和对照组牙源性角化囊肿进行常规病理切片,将病例标本分为:①颌骨骨肉瘤发生转移组;②颌骨骨肉瘤未发生转移组;③牙源性角化囊肿组。(3)抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)免疫组化法观察颌骨骨肉瘤组织切片中破骨细胞的形态及分布。(4)免疫组化法(IHC)分别检测OPG、RANKL、RANK在颌骨骨肉瘤发生转移组、颌骨骨肉瘤未发生转移组和牙源性角化囊肿组中的表达情况。(5)结果判读:每张切片随机选取5个视野,本实验免疫组化结果采用免疫反应积分法(Immunoreactive Score,IRS)进行判读,即染色强度(Staining Intensity,SI):无着色为0分,淡黄色为1分,棕黄色为2分,棕褐色为3分;阳性细胞百分比(Percentage of Positive Cells,PP):阴性为 0 分,1%-25%为 1 分,26%-50%为 2 分,51%-75%为 3 分,>75%为 4 分;IRS=SI*PP,IRS 等于 0 分为阴性(-),IRS等于1-4分为弱阳性(+),IRS等于5-8分为阳性(++),IRS等于9-12分为强阳性(+++)。(6)数据处理:采用SPSS 23.0软件对所得数据(OPG、RANKL和RANK蛋白表达情况)进行相关统计学分析,等级资料采用非参数检验中多个独立样本的Kruskal-Wallis秩和检验,等级相关性采用Spearman非参数相关性分析,取假设检验水准α=0.05,以P<0.05代表差异具有统计学意义。[结 果](1)TRAP染色结果显示:颌骨骨肉瘤组织中存在较多破骨细胞,染色阳性区表现为酒红色或深紫红色,破骨细胞分布密集,形态呈多边形、大小不一,胞内有多个细胞核。(2)OPG免疫组织化学染色检测结果显示:OPG蛋白的表达主要定位于细胞外基质中。三组中OPG的表达强度存在差异(P<0.05):颌骨骨肉瘤发生转移组中OPG表达强度和牙源性角化囊肿组织中的OPG表达强度差异没有统计学意义(P>0.05);颌骨骨肉瘤未发生转移组中OPG表达强度高于牙源性角化囊肿组织,差异具有统计学意义(P<0.05);颌骨骨肉瘤未发生转移组中OPG的表达强度高于发生转移组,差异具有统计学意义(P<0.05)。(3)RANKL免疫组织化学染色检测结果显示:RANKL蛋白的表达主要定位于细胞质和细胞膜中。三组中RANKL的表达强度存在差异(P<0.05):颌骨骨肉瘤发生转移组中RANKL表达强度高于牙源性角化囊肿组织,差异具有统计学意义(P<0.05);颌骨骨肉瘤未发生转移组中RANKL表达强度高于牙源性角化囊肿组织,差异具有统计学意义(P<0.05);颌骨骨肉瘤发生转移组中RANKL的表达强度高于未发生转移组,差异具有统计学意义(P<0.05)。(4)RANK免疫组织化学染色检测结果显示:RANK蛋白的表达主要定位于细胞质和细胞膜中。三组中RANK的表达强度存在差异(P<0.05):颌骨骨肉瘤发生转移组中RANK表达强度高于牙源性角化囊肿组织,差异具有统计学意义(P<0.05);颌骨骨肉瘤未发生转移组中RANK表达强度高于牙源性角化囊肿组织,差异具有统计学意义(P<0.05);颌骨骨肉瘤发生转移组RANK中的表达强度高于未发生转移组,差异具有统计学意义(P<0.05)。(5)颌骨骨肉瘤发生转移组中OPG、RANKL、RANK的表达强度相关性分析:OPG与RANKL间不存在相关性关系(P=0.053>0.05);OPG与RANK之间也不存在相关性关系(P=0.079>0.05);而RANKL与RANK之间相关性显著且存在正相关性关系(rs=0.980,P<0.001)。(6)颌骨骨肉瘤未发生转移组中OPG、RANKL、RANK的表达强度相关性分析:OPG与RANKL之间相关性显著且存在负相关性关系(rs=-0.771,P<0.001);OPG与RANK之间相关性显著且存在负相关性关系(rs=-0.841,P<0.001);RANKL与RANK两者之间相关性显著且存在正相关性关系(rs=0.862,P<0.001)。(7)牙源性角化囊肿组中OPG、RANKL、RANK的表达强度相关性分析:OPG与RANKL之间相关性显著且存在负相关性关系(rs=-0.75,P=0.012<0.05);OPG与RANK之间不存在相关性关系(P=0.052>0.05);RANKL与RANK两者之间相关性显著且存在正相关性关系(rs=0.882,P=0.001<0.05)。[结论](1)颌骨骨肉瘤组织中存在较多破骨细胞且分化活跃,与颌骨的吸收破坏有关。(2)在颌骨骨肉瘤组织中能检测出OPG、RANKL、RANK的表达,且RANKL、RANK在颌骨骨肉瘤组织中的表达水平显著高于牙源性角化囊肿组织。(3)在颌骨骨肉瘤发生转移时RANKL、RANK的表达水平显著增强。(4)颌骨骨肉瘤组织中RANKL与RANK两种蛋白的表达水平存在正相关性关系。(5)OPG/RANKL/RANK信号轴参与了颌骨骨肉瘤的发生发展和侵袭转移过程。