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酪蛋白糖巨肽(Casein Glycomacropeptide, CGMP)是一种由凝乳酶(或胃蛋白酶)水解酪蛋白中κ-casein的Phe105-Met106的肽键得到的具有64个氨基酸残基的短肽。CGMP具有多种生物活性。目前CGMP生产主要是从乳清中提取,由于乳清中乳糖、乳清蛋白等的存在,使大规模生产CGMP存在一定的技术困难。本文研究以酶解干酪素工艺生产CGMP,并对酶解工艺中的凝乳酶进行固定化研究,降低工业成本,同时利用多种方法分离提纯CGMP,获得不同纯度的CGMP的制备工艺。凝乳酶的固定化工艺根据单因素实验结果,采用Minitab软件对影响固定化凝乳酶的主要因素进行了筛选,结果表明加酶总量、固定化时间、戊二醛浓度对凝乳酶固定化有显著影响。根据Minitab的分析结果,采用Design Expert软件中响应面设计及分析对酶解主因素进行了优化,经软件分析预测优化后,并根据实际条件最终确定戊二醛浓度为13%,酶总量200mg/(g载体),交联化时问3h,固定化时间50min。对固定化凝乳酶的酶学性质和稳定性进行了测定,其最适温度55℃、最适pH为5.5,具有很好的稳定性。固定化酶活力回收率达到26.59%。通过对固定化酶与游离酶生产CGMP的比较,发现酶解干酪素的上清液中CGMP的含量没有明显差异。可重复使用6次,说明该固定化凝乳酶具有良好的操作稳定性。保存2个月的酶活仍在80%以上,具有很好的工业化应用潜力。在酪蛋白糖巨肽的分离纯化部分,考察了膜过滤分离方法与离子交换层析的最佳条件。结果表明以截留量为5000Da的超滤膜,确定了超滤压力为0.03Mpa,pH值7。筛选出阴离子交换树脂D280对CGMP进行分离纯化,上样量1/10 BV, pH为6.5,洗脱流速1BV/h,0.4,0.6, 1.0mol/L的NaCl洗脱梯度,各梯度洗脱体积为1.5BV,其中CGMP被洗脱浓度为0.6mol/L的NaCl,酪蛋白糖巨肽的回收率可以达到75.68%。通过不同的分离方法,在确定的最佳条件下,经过喷雾干燥制得3种不同纯度的CGMP样品,根据国家标准,测定样品相关理化指标,并与丹麦样品进行比较。结果表明制的CGMP样品二和三的糖基化度和纯度较高,且符合产品的卫生指标。