背景骨-肌腱结合部(Bone-Tendon Junction, BTJ)损伤是一种常见的疾病。目前对于肩袖损伤后的BTJ损伤修复机制尚未阐明，尤其在肌腱与骨愈合期间，任何过于激进的康复都有可能导致结合部断裂而失败。因此，我们需要构建一种合适的动物模型，进一步探索能有效改进肩袖BTJ愈合的速度和强度的新方法。本研究根据肩袖损伤的临床特点，设计了SD大鼠的冈上肌腱损伤愈合的模型，并验证该模型的实用性。目的本研究设计了新的肩袖冈上肌BTJ损伤愈合动物模型，以模拟BTJ损伤后愈合的组织学过程，为肩袖冈上肌损伤愈合机制提供了理论和实验基础。方法1、实验设计：雌性SD大鼠40只(第二军医大学动物实验中心提供)，体重(180-200)g。5只大鼠为正常对照组，其余35只为实验组，分别在建模后7d、14d、21d各处死10只进行组织学和免疫组化观察，实验组行左肩关节冈上肌损伤与重建手术，对照组不处理。2、模型制备的手术方法：10%水合氯醛注射液400mg／kg腹腔注射麻醉，麻醉后取俯卧位并置于无菌台。在左肩部肩胛冈区域，肩胛骨下缘切开2-3cm横行皮肤切口，沿大圆肌与背阔肌肌间隙斜向上锐性剥离至肩胛骨，显露肩胛骨中下段，轻微可见肩胛骨下缘外侧冈上肌以及腱性部分，沿腱性部分找到与左侧肱骨连接部，并显露肱骨头，将SD大鼠一侧肩的冈上肌腱自骨-肌腱结合部切断，用布巾钳在大结节原冈上肌附着的足迹处建立两个平行的骨性隧道，再用不可吸收肌腱缝合线穿过骨道，将冈上肌腱缝合在原位，建立SD大鼠骨表面BTJ损伤愈合模型。3、取材及制作标本：分别在建模后7d、14d、21d各处死10只进行组织学和免疫组化观察，切取冈上肌腱远端以及与其相连的肱骨骨块为一个完整的BTJ样本，同时取1只正常组大鼠的左侧BTJ样本为对照。进行HE染色，比较愈合过程不同时间BTJ中瘢痕组织的形成和转归的特点，以及纤维软骨的分布及其与正常BTJ的差别。免疫组化染色，400倍光镜下观察切片中TGF-β1、AR-Smads的表达和分布情况.4、观察方法和结果测定：400倍光镜下观察切片中TGF-β1、AR-Smads的表达和分布情况，每张切片选随机取5个高倍视野。采用二级计分法判定结果：按染色强度分级，淡黄为1分，黄或深黄2分，褐或棕黄色3分；阳性细胞计<10％为0分，阳性细胞计数10％～25％为1分。阳性细胞计数25～50％为2分，阳性细胞计数50～75％为3分，阳性细胞计数>75％为4分；两者相加<2分为阴性(－)；2～3分阳性(＋)；4～5分中等阳性(＋＋)；6～7分强阳性(＋＋＋)。5、统计学分析：不同时间点的TGF-β1、AR-Smads的阳性率比较采用卡方检验，以明确TGF-β1、AR-Smads的表达在不同时间点是否存在差异。结果1、观察冈上肌腱远端以及与其相连的肱骨骨块完整的BTJ样本比较。对照组：可见正常冈上肌肌腱与肱骨的正常骨腱连接；术后7d、14d、21d组：可见冈上肌肌腱与肱骨连接处周围瘢痕组织明显增生，且随时间增加瘢痕组织增生范围逐渐增大。2、HE染色光学显微镜观察: HE染色示BTJ处肌腱纤维、软骨以及骨组织层次清楚，细胞排列整齐。术后7d、14d：HE染色示BTJ处梭形成纤维细胞满视野，未见软骨细胞。术后21d：HE染色示BTJ处成纤维细胞内可见散在少量软骨细胞增生。3、免疫组化普通光学显微镜观察。术后各时间点与对照组相比均有统计学意义（P<0.05）。TGF-β1在术后7d时阳性率20%，14d时阳性率60%,21d时阳性率50%，其中14d与7d相比有明显统计学意义（P＜0.05）,其余比较无明显统计学意义。AR-Smads在术后7d时阳性率分别为30%，14d时率70%，21d时阳性率60%，其中在14d与7d相比有明显统计学意义（P＜0.05）,21d与14d相比无明显统计学意义（P＞0.05）。结论研究表明，在肌腱修复后腱骨界面愈合早期有多种生长因子高表达，但其中被认为与瘢痕的形成关系最为密切的是TGF-β1。在大鼠前交叉韧带重建的模型中，术后4天BTJ内便可见分泌TGF-β1的主要细胞-巨噬细胞的积聚，一直持续到术后3-4周。在大鼠冈上肌止点损伤修复的愈合早期，TGF-β1在止点处积聚，在术后10天达到高峰，正好与随后的BTJ瘢痕增生的高峰吻合。本研究发现，TGF-β1在术后14天时出现高表达，并且持续表达至术后21天，与随后的BTJ瘢痕增生的高峰一致。AR-Smads(包括Smad2和3)在术后14天时也出现高表达，与随后的BTJ瘢痕增生的高峰一致。通过该研究证实TGF-β1、AR-Smads是促使BTJ愈合过程中瘢痕发生的关键因子之一。以上结论表明该模型符合BTJ损伤愈合模型标准，应用价值较高。