目的BRAF^V600E突变引起的Ras/Raf/MEK/ERK信号途径的持续激活是结肠癌形成和发展的重要原因之一。lncRNA作为一种非编码RNA,可参与表观遗传修饰、细胞周期调控及细胞分化等多种生物学过程。然而,外泌体lncRNA在BRAF^V600E突变型结肠癌中的表达情况及其意义尚不明确。本研究通过高通量测序技术分析BRAF^V600E突变型和BRAF^V600E敲低型结肠癌细胞株外泌体中lncRNA、mRNA的表达谱,筛选差异性表达的lncRNA、mRNA。通过生物信息学技术分析差异lncRNA靶基因、差异mRNA的生物学功能及参与的信号通路,初步预测BRAF^V600E突变型及敲低型结肠癌细胞株外泌体差异lncRNA的生物功能。方法1.使用外泌体试剂盒分别提取HT29(BRAF^V600E突变型)细胞株、1627(BRAF^V600E敲低型)细胞株培养液上清中的外泌体;2.透射电子显微镜验证外泌体形态;3.Western blot法鉴定外泌体表面标志物;4.使用Qiagen试剂盒分别提取HT29(BRAF^V600E突变型)细胞株、1627(BRAF^V600E敲低型)细胞株培养液上清外泌体中的RNA;5.应用Qubit?RNA试剂盒检测RNA的浓度,Agilent 2100 pic6000评估RNA的完整性;6.构建HT29(BRAF^V600E突变型)细胞株、1627(BRAF^V600E敲低型)细胞株外泌体RNA文库,经上机测序、质量评估、序列比对拼接及转录本拼接、筛选lncRNA及mRNA、定量分析等步骤构建lncRNA、mRNA差异表达谱;7.利用生物信息学技术对差异lncRNA靶基因、差异mRNA进行GO及KEGG功能富集分析,预测差异lncRNA可能发挥的生物信息功能。结果1.HT29(BRAF^V600E突变型)细胞株、1627(BRAF^V600E敲低型)细胞株分泌的外泌体均为包膜完整的圆形或椭圆形囊泡,直径在30-100nm之间。2.HT29(BRAF^V600E突变型)及1627(BRAF^V600E敲低型)细胞株外泌体表面均表达CD9、CD63。3.从HT29(BRAF^V600E突变型)及1627(BRAF^V600E敲低型)细胞株中提取的外泌体RNA质量、完整性均符合建库要求。4.从HT29(BRAF^V600E突变型)及1627(BRAF^V600E敲低型)细胞株外泌体RNA中共筛选出35条差异表达lncRNA和428条差异表达mRNA,其中13条lncRNA、192条mRNA在HT29(BRAF^V600E突变型)细胞株外泌体中表达上调,22条lncRNA、236条mRNA在1627(BRAF^V600E敲低型)细胞株外泌体中表达上调。5.差异lncRNA靶基因与差异mRNA生物学功能和信号通路相似,涉及细胞成分构成、增殖、代谢、迁移等方面。结论1.lncRNA、mRNA在BRAF^V600E突变型和BRAF^V600E敲低型结肠癌细胞株培养液上清外泌体中表达存在差异。2.差异lncRNA靶基因与差异mRNA预测到的生物学功能、信号通路相似。我们初步认为,外泌体lncRNA通过调控mRNA在BRAF^V600E突变型结肠癌的发生发展过程中发挥作用。