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目的1.研究SRp20蛋白在胰腺癌细胞的表达情况;2.研究雷公藤甲素(Triptolid,简称TPL)诱导人胰腺癌细胞凋亡作用与SRp20蛋白的相关性;3.探讨SRp20蛋白与雷公藤甲素诱导胰腺细胞凋亡p53相关途径的机制。方法1.取含10%胎牛血清的DMEM高糖培养液培养胰腺癌细胞株HPDE6-C7、As PC-1、PANC-1和Bxpc-3,传代至10-20代的对数期细胞进行实验;2.采用MTT法与Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测TPL对As PC-1胰腺癌细胞增殖抑制及凋亡的影响;3.应用Western blot检测:①HPDE6-C7、As PC-1、Bx PC-3和PANC-1细胞内SRp20蛋白的表达水平并应用相对定量法分析各细胞组SRp20的表达性差异;②As PC-1细胞胞内SRp20、p53、p53β和Bax蛋白的表达水平,并应用相对定量法分析比较不同实验处理组SRp20、p53、p53β和Bax蛋白的表达差异。结果1.细胞形态学观察经TPL处理的As PC-1细胞,加药12.5、25、50n M/LTPL处理48h组比较无处理对照组,细胞密度明显减少,出现不同程度凋亡,细胞形态不一,胞内肿胀,出现空泡样变;2.MTT结果显示使用TPL经不同作用时间和浓度处理的As PC-1细胞,比较无处理对照组细胞均出现明显的增值抑制,其中加药24h、48h、72h各浓度组细胞均受不同程度抑制,呈时间依赖效应,各时间组在12.5、25、50 n M/L范围,抑制率与加药剂量呈明显正相关效应,其中24h各加药剂量组的生长抑制率分别为25.28±2.18%(12.5n M/L)、36.01±1.82%(25 n M/L)、60.03±1.67(50 n M/L)[实验组与对照组间,p<0.01];3.FCM Annexin V-FITC、PI双染法凋亡检测显示,经不同浓度TPL处理As PC-1细胞48h,加药12.5、25、50组凋亡比例分别为9.45±1.92、30.1±2.57%、44.23±4.36%(实验组与对照组间,p<0.01),随着TPL加药剂量的增加凋亡比例亦明显增加;4.Westernblot印迹实验结果显示:①相较于人胰腺导管上皮细胞系HPDE6-C7,人胰腺癌细胞系As PC-1,Bx PC-3、PANG-1的SRp20蛋白表达明显上调(实验组与对照组间p<0.01);②相较于无处理对照组,SRP20蛋白在TPL诱导胰腺癌细胞As PC-1凋亡中的表达水平明显下调,而p53、p53β和Bax蛋白的表达水平均呈明显上调趋势,且SRP20的表达浓度在一定的加药剂量范围内(TPL6.25~50nmol/L)存在量效与时间依赖性(实验组与对照组间,p<0.01),而p53、P53β和Bax蛋白的表达浓度则在一定的剂量范围内内(TPL6.25~50nmol/L)存在量效依赖性(实验组与对照组间,p<0.01)。结论1.本研究发现人胰腺癌细胞高表达SRp20蛋白,表明胰腺癌的发生机制与SRp20蛋白高表达可能具有相关性;2.本研究发现雷公藤甲素可下调人胰腺癌细胞中SRp20蛋白的表达;3本研究发现受SRp20蛋白调节的p53β蛋白(p53蛋白亚型)在雷公藤甲素诱导人胰腺癌细胞凋亡中表达上调,提示雷公藤诱导胰腺癌细胞凋亡作用与SRp20蛋白调节p53β蛋白的表达可能具有相关性。