晶状体上皮细胞光损伤与活性氧作用及TGF-β2/Smad3信号传导通路的研究

被引量 : 6次 | 上传用户:glory001
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:白内障是全世界首位的致盲性眼病,虽然不同的损伤因子导致白内障的通路和机制各不相同,但是它们大多通过一共同的中间产物——活性氧,累积的光暴露诱发的活性氧自由基所导致的晶状体上皮细胞凋亡与老年性白内障的发生关系密切,另外TGF-β2/Smad3信号传导通路与白内障及晶状体上皮细胞凋亡之间的关系得到越来越多的关注。本研究采用发光二极管(light emitting diode,LED)光源制作晶状体上皮细胞(lens epithelial cell,LEC)光损伤模型,探讨LEC光损伤与活性氧和TGF-β2/Smad3信号传导通路之间的关系,本研究进一步观察了具有活性氧清除作用的丹参素和阻断TGF-β2/Smad3信号传导通路对LED光源诱导人晶状体上皮细胞光损伤所致凋亡的影响,进一步评价了活性氧和TGF-β2/Smad3信号传导通路在以上过程中的作用。方法:本研究包括三部分:1.使用LED光源20000勒克斯照度Oh、6h、12h、24h照射LEC,使用流式细胞术检测LEC内活性氧的表达及细胞凋亡情况,分别使用Real-time PCR和Western blotting检测BAX和TGF-β2mRNA和蛋白表达,使用四甲基噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖。2.在第一部分基础上,使用具有活性氧清除功能的丹参素,观察丹参素光照组和光照组LEC在LED光源20000勒克斯照度照射24h后,细胞内活性氧的表达、细胞凋亡率、BAX基因和BAX蛋白表达等各项指标的差异。3.以pSilencer2.1-U6neo为质粒载体,构建Smad3的siRNA表达质粒,转化大肠杆菌、酶切、测序进行鉴定,利用siRNA阻断Smad3信号传导通路后,观察其与对照组在LED光源20000勒克斯照度照射24h后,细胞凋亡率、BAX基因和BAX蛋白表达等各项指标的差异。结果:1.光照0h组、6h组、12h组、24h组LEC内活性氧平均荧光强度、早期凋亡率、总凋亡率随光照时间的延长逐渐上升,且各组间差异有统计学意义(P<0.05)。光照6h、12h、24h组,BAX的mRNA表达较0h组分别升高约1.45倍、5.45倍和15.86倍,TGF-β2的mRNA表达分别升高约1.22倍、1.79倍和4.01倍,各组间表达差异有统计学意义(P<0.05)。光照24h组BAX和TGF-β2蛋白的表达量分别较0h组升高约1.85倍和2倍。MTT实验0h组和24h组在570nm处的吸收值分别为0.991±0.014和0.858±0.032,两组间差异有统计学意义(P<0.05)。2.光照组和丹参素光照组ROS平均荧光强度分别为15.83+5.81和7.67+0.63,两组间差异具有统计学意义(t=2.882,P=0.034)。光照组和丹参素光照组HLEB-3细胞总凋亡率分别为5.22%±1.63%和1.57%±1.21%,两组间差异有统计学意义(t=3.11P=0.036)。光照组BAX基因的表达水平是丹参素光照组的9.51±3.23倍,两组间差异有统计学意义(t=-4.566,P=0.010)。光照组、对照组和丹参素光照组BAX蛋白条带的校正后灰度值分别为0.297、0.065和0.100。MTT实验光照组、对照组和丹参素光照组,在570nm处的吸收值A570分别为1.002±0.017、1.230±0.025、1.116±0.033,三组间比较差异有统计学意义(F=57.028,P<0.0001),且每两组之间比较差异均有统计学意义P<0.05)。3.转染Smad3siRNA光照组、转染空载体光照组总凋亡率分别为2.04%±1.03%和5.80%±1.12%,两组间差异有统计学意义(t=-4.298,P=0.013)。光照组BAX基因表达是转染Smad3siRNA光照组的2.36±±0.57倍,两组间差异有统计学意义(t=-4.111,P=0.015)。转染空载体光照组BAX基因的表达是转染Smad3siRNA光照组的3.10±0.76倍,两组间差异有统计学意义(t=-4.804,P=0.041)。转染Smad3siRNA光照组、转染空载体光照组、光照组、对照组BAX蛋白条带的校正后灰度值分别为0.193、,0.586、0.283、0.036。结论:1.随光照时间的延长LEC活性氧含量、早期凋亡率、总凋亡率、BAX基因和蛋白表达、TGF-β2基因和蛋白表达升高,细胞增殖活性下降。TGF-β2可能参与了光诱导的LEC的活性氧损伤和细胞凋亡的过程。2.丹参素可以明显降低光损伤诱导的人晶状体上皮细胞内的活性氧水平,降低细胞凋亡的发生,丹参素对于光诱导的晶状体上皮细胞损伤的保护作用可能是通过抑制细胞内活性氧的产生来实现的。3.TGF-β2/Smad3信号传导通路参与了LED光源诱导的人晶状体上皮细胞光损伤所导致的细胞凋亡的过程,且阻断其作用对LED光源光损伤诱导的细胞凋亡有一定的抑制作用。
其他文献
当前中职女生普遍对上体育课积极性不高,习惯中学时代的“放羊式”教学模式,上体育课就等于自由活动,缺乏体育锻炼的意识。这不仅不利于提高其身体素质,还严重影响到体育课的
<正>配电网接地故障处理是电网运行人员非常关心的问题,但当前普遍采用消弧接地模式,因为机理局限存在许多不足,提出的可控接地电阻方案突破以往传统单一模式,提出接地故障全
【目的】云南泸沽湖、程海流域进行广州管圆线虫流行病学调查,初步掌握云南泸沽湖、程海流域广州管圆线虫中间宿主和终宿主的分布及感染情况,检测该流域内人群广州管圆线虫感染
盘式制动器相对于鼓式制动器有许多优点,且造价低廉,在现代中低档轿车上大多采用普通盘式制动器。
研究目的:本研究应用半随机对照原则进行研究,探讨并科学系统地评价增髓汤对乳腺癌术后辅助化疗引起的骨髓抑制和胃肠道反应的作用,以便于增髓汤在临床推广,扩大中药对化疗不
近年来,中国综合实力的增强,使汉语逐渐走向世界,越来越多的人开始学习汉语,为了解决对外语教学教师严重匮乏的问题,国家在开设了对外汉语专业的基础上又设置了汉语国际教育硕士专
文章将使用J2EE和webservice框架完成传输网络管理系统,在本系统中,主要完成对传输网络的管理,包括PTN设备、PTN段管理、隧道管理、隧道保护组、传输系统、传输子网络等.并完
根据运动模糊图像的特点,介绍了运动模糊图像退化模型.在该模型的基础上分析了模糊参数在已知和未知两种情况下模糊图像的PSF(point spread function点扩散函数)的确定方法,
因果关系是一个困扰着无数学者与法官的抽象问题,尤其是在环境侵权责任中,由于无过错责任原则的确立,因果关系成为了能否追究污染者侵权行为的关键因素。然而如何认定污染行
目的缺血性脑卒中患者急性期多伴随认知、睡眠和自主神经功能状况紊乱及障碍,有关脑卒中损伤部位与此类并发症相关关系的研究较多,得出的结论也各不相同,主要研究有大脑半球