【摘 要】
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目的: 探讨RNA干扰表达载体(small interference RNA expression vector)对宫颈癌细胞中HPV16-E6基因的抑制作用,通过体外实验和雌性裸鼠体内实验了解我们构建的载体能否
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目的: 探讨RNA干扰表达载体(small interference RNA expression vector)对宫颈癌细胞中HPV16-E6基因的抑制作用,通过体外实验和雌性裸鼠体内实验了解我们构建的载体能否特异性的沉寂宫颈癌细胞中的HPV16-E6基因及其时效性。 方法: 1.利用计算机辅助设计软件,设计合成含有针对HPV16-E6基因特定序列的56nt寡核苷酸片段,并将其定向克隆入真核表达载体,得到重组质粒E6-1、E6-2、E6-3。 2.脂质体法转染宫颈癌caski和siha细胞株,经G418筛选获得阳性克隆株。应用荧光定量PCR(fluorescence quantitative PCR)技术及流式细胞仪(flow cytomety)检测转染前后及不同时间点HPV16-E6mRNA的变化、HPV16-E6蛋白表达及细胞凋亡的情况。 3.通过细胞生长曲线及克隆形成试验了解转染前后细胞生物学行为的变化。 4.裸鼠皮下接种肿瘤细胞成瘤,不同时间点测定肿瘤体积的差异,肿
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