深绿木霉的拮抗机理、促生作用及制剂加工研究

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本文利用已筛选的具有拮抗作用的深绿木霉菌(Trichoderma aureoviride)作为试材,进行深绿木霉对百合疫霉菌(Phytophthora nicotianae van Brede de Haan)抑制机理、深绿木霉制剂的制备及其对不同植物促生作用等方面的研究。通过对峙培养、菌丝降解、抗生物质测定、对扣培养、圆盘滤膜法、酶活性测定等一系列方法,研究深绿木霉对百合疫霉菌的多种拮抗机理,确定其具有竞争营养与重寄生作用,并发现有抗生物质产生。两者在对峙培养60h时,生长速率比达到3.68,且在其发酵液中测定出较高的β-1,3-葡聚糖酶和几丁质酶的活性。另外,还观察到深绿木霉发酵液对百合疫霉菌丝有降解作用,进一步证实了重寄生作用的存在。在探明拮抗机理的基础上,探讨液固两相发酵的培养成份和条件,确定最佳培养基和培养条件,获得深绿木霉制剂。先将1.0%(V/V)深绿木霉接种于液体麸皮培养基,置于全光照,25℃,pH5.0,摇瓶转速150r/min的条件下进行5d二级扩大培养,得到1.91×1010个/ml的孢子量。再以30%(V/V)的孢子量接种于含水量1:0.8的麦麸-泥土(1:1)固料中,进行三级固体浅盘发酵。采用前期20℃,中期24℃,后期28℃的变温处理,固料厚度1.0cm,每12h搅拌一次,发酵10d,获得孢子浓度为3.41×1010个/g的深绿木霉制剂。试验还确定深绿木霉制剂的干燥温度在30~35℃范围内,干燥48h为宜(活孢率90%以上),且最佳贮存组合为4℃-牛皮纸包装,测定其六个月后的孢子萌发率为32.8%。研究还发现深绿木霉制剂对小麦、苜蓿、黄瓜的发芽和生长均有促进作用。浸种试验表明,深绿木霉剂200X稀释液均能促进小麦、苜蓿发芽,小麦尤其明显(发芽指数和活力指数分别为11.8和0.437)。但其高浓度(10X、20X、50X)却抑制发芽。而盆栽试验显示,对小麦、苜蓿的出苗率,浸种法促进效果比施入法明显。小麦最佳浸种倍数为500,出苗率83%;苜蓿最佳浸种倍数为200,出苗率达87.50%。此外,适当的施入组合(施入量+施入深度)更利于小麦、苜蓿的生长,其苗干重、相对生长率及植株干物质积累等指标均高于对照,促生作用明显。对黄瓜,则喷洒法促生效果优于施入法,最佳喷洒浓度为106个/ml。
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