牛奶作为最古老的天然饮料之一,能够为人们提供充足的营养和能量,也被称为最接近完美的食物。乳脂肪是牛奶的重要营养成分,乳脂肪含量的高低决定着牛奶品质优劣。近年来,我国奶牛业发展迅速,奶牛产奶量也日益提高,但乳脂肪含量普遍偏低,极大削弱我国乳制品的国际竞争力。因此,提高乳脂肪含量已成为我国奶牛产业迫待解决的问题。越来越多的研究表明miRNAs在乳脂的合成中起着重要的调控作用,而miR-143是与脂质代谢密切相关的miRNA之一。本研究旨在探究miR-143是否参与奶牛乳腺上皮细胞（BMECs）乳脂代谢调控,以期明确miR-143在调控乳脂合成中的作用及可能机制。在本研究中,我们以奶牛乳腺上皮细胞为研究模型,首先通过转染miR-143模拟物（mimic）和抑制物（inhibitor）分析miR-143表达变化对乳脂肪合成的影响,进而通过转录组测序和Target Scan网站相结合筛选miR-143的候选靶基因,并通过双荧光素酶报告系统鉴定miR-143靶基因,最后验证靶基因在乳脂合成中的作用。获得的主要实验结果如下:（1）miR-143的过表达显著促进了脂滴的积累,提高了BMECs内甘油三酯（TAG）的水平,而miR-143的抑制则显著抑制了BMECs中TAG的合成和脂滴的积累。（2）BMECs中的miR-143的过表达能显著上调脂质合成相关基因PPARγ、SCD1、C/EBPβ、SREBP1和FASN等基因的表达;而抑制miR-143的表达时,PPARγ、SCD1、C/EBPβ、SREBP1和FASN等基因的表达量下降。（3）转录组测序结果表示miR-143在奶牛乳腺上皮细胞中的过表达显著引起了846个基因上调和726个基因下调;且KEGG分析显示,miR-143对乳脂合成的调控作用可能是通过Wnt、TGF-β等脂代谢相关信号通路实现的。（4）结合转录组测序数据,使用Target Scan数据库预测miR-143的靶基因,发现Smad3在其3’-UTR处具有miR-143结合位点,双荧光素酶报告系统确认Smad3为miR-143的直接靶基因,干扰Smad3基因显著提高BMECs内TAG水平。综上,miR-143通过靶向Smad3促进奶牛乳腺上皮细胞乳脂合成,miR-143可能在未来成为调节乳脂合成的生物标志物或潜在的治疗靶标,将为奶牛分子育种提供理论与试验依据。