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背景及目的NK/T细胞淋巴瘤(Natural Killer T-Cell Lymphoma,NKTCL)是一种起源于成熟的T细胞和NK细胞的非霍奇金淋巴瘤亚型。NKTCL多发于东亚和拉丁美洲,而罕发于欧美国家。目前发病机制仍在研究中,由于其早期临床表现不典型,进展迅速、预后不良,尚缺乏血浆中特异性的分子诊断、疗效预测的生物标志物。环状RNA(circular RNA,circRNA)是5’端和3’端通过反向剪接而形成的共价闭合连续的环状的非编码RNA。CircRNA可以充当竞争性内源RNA,从而调节转录和翻译。同时,因其特殊的环状结构而具有独特的保守性、稳定性、阶段和组织特异性,具有成为生物标志物的潜力。然而,在NKTCL中circRNA的临床意义和生物学机制尚无报道。本文检测了 circRNA在NKTCL患者血浆中的表达谱,探讨circRNA在NKTCL中的临床意义,并探索其生物学分子机制。方法1.通过NKTCL患者及健康对照者血浆circRNA芯片微阵列表达谱检测,及小样本qRT-PCR验证,筛选在NKTCL患者和健康对照者血清中显著差异表达的目的circRNA。2.通过qRT-PCR在NKTCL患者及健康对照者血浆中验证目的circRNA的相对表达量。并结合临床资料进行相关统计学分析。3.构建shRNA并包装干扰慢病毒,转染NKTCL细胞系,构建体外干扰模型。进行细胞功能实验,CCK-8实验和AnnexinV流式凋亡实验。4.构建裸鼠皮下成瘤模型,测量肿瘤体积和质量,并进行TUNEL检测和免疫组织化学染色。5.生物信息学预测目的circRNA可以结合的miRNA,并通过双荧光素酶报告实验验证。预测下游蛋白,并通过western blot和免疫组化进行体内外蛋白表达量的测定。结果1.通过6位NKTCL患者和6位健康对照者的血浆circRNA微阵列分析,差异表达(FC值>1.0)的上调circRNA共有6137个,下调circRNA共有6190个。其中,满足FC值>2.0并且P<0.05的circRNA,上调表达有170个,下调表达有188个。通过小样本实验筛选出circADARB1在NKTCL患者血浆中稳定表达且差异显著。2.CircADARB1在NKTCL患者血浆中的相对表达量明显高于健康对照组,绘制受试者工作特征曲线(ROC)并计算ROC曲线下面积(AUC)为0.742±0.050,且敏感度为0.860,特异度为0.600。临床资料分析中,circADARB1相对表达量与疗效评价有关。3.CCK-8检测显示敲低circADARB1细胞增殖降低,Annexin V凋亡检测显示敲低circADARB1细胞凋亡增加。4.裸鼠皮下成瘤实验中,敲低circADARB1后,肿瘤体积明显较小,质量较轻。Ki-67在敲低circADARB1肿瘤组织中呈弱阳性,TUNEL在敲低circADARB1肿瘤组织中呈阳性。5.生物信息学预测circADARB1可以结合miR-214-3p。双荧光素酶报告实验结果表明circADARB1和miR-214-3p存在相互作用。生物信息学预测miR-214-3p能够调控p-Stat3。敲低circADARB1后,p-Stat3的蛋白表达量降低。在裸鼠肿瘤组织中,p-Stat3在敲低circADARB1肿瘤组织中低表达。结论1.CircADARB1在NKTCL血浆中高表达,是协助诊断及预测疗效的潜在生物标志物。2.敲低circADARB1抑制体内外NKTCL细胞增殖。3.CircADARB1 结合 miR-214-3p,并调控 p-Stat3。