一种可时间调控的基因线路的研究

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合成生物学中的振荡器指的是一种能够使得蛋白表达随着时间发生振荡的基因线路,利用基因表达时转录、翻译、折叠的延迟来形成这一行为,通常使用奇数个负反馈来构建,也有使用正负反馈相结合来构建的研究,但大多使用同时受正负反馈调控的杂合启动子来构建。本论文使用单纯的正、负反馈启动子尝试构建振荡器。首先设计了几种不同的基因线路,并对其中所使用的PR、PLux、PLac以及查找到的双重阻遏启动子等进行了验证,最终选择表达效率较高且可控的PLux、PLac及相应的调控蛋白来构建此基因线路。为防止蛋白的积累,在调控蛋白C末端添加促降解的ssrA标签。最终构建了两套略有差异的基因线路:Os-LAA以及Os-ASV。发现当使用葡萄糖作为碳源时,荧光不强,且大多数的菌体在检测时出现荧光降低。Os-LAA中少部分菌体出现振荡,振荡周期T=68.3±20分钟。当使用甘油作为碳源时Os-ASV荧光较强,出现波动上升的情况,振荡周期T=121±21分钟。
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