目的:研究兔角膜缘上皮细胞(含干细胞)、口腔粘膜上皮细胞在羊膜上种植及生物学特征,探讨利用组织工程技术体外重建角膜上皮组织的方式,试图探索眼表重建良好的、来源丰富的的移植材料和方法。方法:⑴用0.25%胰蛋白酶、0.02%EDTA等量混合消化液消化去除保存羊膜的上皮细胞,获取去上皮羊膜。采用去上皮羊膜的基底膜面以及直接用保存羊膜复水后得到的完整羊膜作为载体。⑵将兔角膜缘组织块和通过消化法消化后获得兔角膜缘上皮细胞分别种植于去上皮羊膜基底膜和完整羊膜上。采用DMEM/Ham,s-F12培养基进行体外培养扩增。⑶在倒置显微镜下观察组织块和细胞种植于羊膜后的动态生长过程,将培养获得的复合角膜上皮片作常规病理切片HE染色、透射电镜观察。从形态学、组织学、超微结构等方面同生理状态下的角膜上皮相比较。⑷采用AE5单克隆抗体作为一抗,SP系列试剂盒作为二抗,DAB显色剂显色对获取的复合组织行免疫组化检测,鉴定培养组织中有角膜特异性角蛋白3表达。⑸采用相同的培养基、培养方法在去上皮羊膜上种植兔口腔粘膜上皮细胞,观察与角膜缘上皮细胞种植相同的生物学指标。