虽然近年来治疗技术有了长足的进步,但恶性肿瘤仍然是世界性难题。基于腺病毒载体的基因治疗进展迅速,并已经开展了大量的临床前和临床研究,其中CRCA受到了广泛的关注。由于CRCA具有肿瘤特异性复制的功能,此类溶瘤腺病毒还可以扩散到毗邻的肿瘤细胞。另外,研究表明CRCA的应用还能够刺激机体产生抗肿瘤免疫反应,从而对放、化疗起到辅助作用。更重要的是,配合恰当的抑癌基因,CRCA具有治疗原发和转移肿瘤的作用。肿瘤治疗的成功不仅取决于其清除肿瘤细胞的有效性,特异性也是关键的指标之一。基于NDV的疫苗已在畜禽养殖业和兽医领域取得了瞩目的社会和经济效益,另外,这种病毒还具有抗肿瘤作用。Cassel早在19世纪60年代就发现NDV的抑癌作用,并在临床应用NDV73T进行了恶性黑色素瘤的实验性治疗研究。HN蛋白是NDV最主要的结构蛋白之一,通过疏水N端连接病毒囊膜。HN蛋白同时具有血凝素活性和类似流感病毒的神经氨酸酶活性,具有通过与靶细胞表面NAcneu相互作用调节病毒感染与复制的功能。与流感病毒不同的是,HN的NA和HA存在于同一功能结构域中。因此,HN糖蛋白不仅可以介导受体的识别,并且能够发挥NA活性裂解NAcneu等受体。以往的研究表明,做为抗肿瘤免疫佐剂,HN蛋白具有活化DC、单核细胞、NK、激活IL-12受体p链和稳定活化的T细胞的作用。另外,HN能够刺激DC等PBMC产生大量的IFN-α,其分泌量可高于其他血细胞1000倍以上。在IL-12和IFN-α的协同作用下,HN能够激活T细胞、诱导产生迟发型免疫反应、CTL和Thl型细胞免疫反应。HN诱导产生的IFN-a还能够上调系列与抗原识别、细胞相互作用、细胞黏附和细胞作用相关的功能因子。目前,人类基因治疗领域的研究中有27%应用腺病毒载体。最常见的是第一代腺病毒载体,此类载体是E1基因缺失型的复制缺陷型载体。E1基因在腺病毒感染宿主细胞后即开始表达,并参与病毒基因表达、宿主细胞蛋白和病毒复制相关蛋白表达调控。其中E1A与E1B的功能与肿瘤抑制基因Rb和p53的激活有关。在第一代腺病毒载体出现后,又出现了其他腺病毒载体(E1和E3缺失、E2缺失、E4缺失、E2和E4缺失、E1/E2/E4缺失等)。研究表明,E3基因与病毒感染和宿主免疫调控有关。E2和E4基因则与转录调节、DNA重组和病毒装配等过程有关。许多腺病毒载体候选药物,如ONYX-015(d11520),已开展了体内、外研究,甚至已进入临床研究阶段。但是,由于出现腺病毒相关临床实验副反应的报道,腺病毒载体候选药物的安全性受到了质疑。由于腺病毒载体半衰期较短,并存在抗载体免疫的问题,因此,人们试图通过加大药物剂量提高其抗肿瘤作用,但这种方法存在产生肝毒性和免疫副反应的可能。基于以上原因,腺病毒载体候选药物的系统应用受到了限制。为克服上述缺陷,人们开展了大量研究,这包括利用其他血清型腺病毒制备腺病毒载体、改造腺病毒载体衣壳蛋白、制备病毒／非病毒杂交载体等。本研究中,我们利用以往构建的重组腺病毒Ad-HN-PEG3p-E1a,开展了抗肿瘤作用研究。该重组病毒通过PEG3p启动子实现了肿瘤特异性复制,通过NDVHN实现了肿瘤特异性杀伤。MTT实验结果表明,当Ad-HN-PEG3p-E1a作用于人肝癌细胞HepG-2时,其抑瘤作用在48h时开始显现,当感染剂量为100MOI或10MOI时,其抑瘤作用在4d后已十分明显,但感染剂量为1MOI时,抑瘤作用相对较弱。在L02细胞的情况与HepG-2细胞实验组不同,Ad-HN-PEG3p-E1a对其未产生明显的抑制作用。另外,annexin V染色实验结果表明,虽然Ad-HN-PEG3p-E1a实验组、Ad-EGFP-PEG3p-E1a实验组和Ad-HN实验组均出现不同程度的抑瘤现象,但Ad-HN-PEG3p-E1a细胞凋亡比例稍高。上述实验说明,Ad-HN-PEG3p-E1a能够通过诱导HepG-2肿瘤细胞凋亡实现对HepG-2肿瘤细胞的抑制作用。本研究还对Ad-HN-PEG3p-E1a的体内抑瘤作用进行了研究,结果进一步验证了体外实验的结果。实验证明,虽然Ad-HN-PEG3p-E1a不能完全清除模型动物体内实体肿瘤,但却明显延缓了实体肿瘤的发展。另外,实验还表明,Ad-HN-PEG3p-E1a感染的HepG-2肿瘤细胞能够刺激NK产生抗肿瘤细胞因子,并增强NK细胞对HepG-2肿瘤的杀伤。体内的研究并未发现Ad-HN-PEG3p-E1a对模型动物的明显毒副作用。因此,Ad-HN-PEG3p-E1a具有应用于肿瘤治疗和研究领域的潜质。