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目的:探讨心肌营养素-1(cardiotrophin-1,CT-1)在高静水压下促心肌成纤维细胞增殖的作用,观察三条位于gp130下游的信号通路,即JAK-信号传导子和转录激活子3(singal transducer and activator of transcription3, JAK- STAT3)通路、细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal regulatedkinases1/ 2,ERK1/2 )通路和磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatedylinos Itol 3 kinas,PI3-K)通路在心肌营养素-1 (cardiotrophin 1,CT-1)致心肌成纤维细胞增殖中的作用。方法:差速贴壁法原代培养心肌成纤维细胞,3-4代细胞用于实验,倒置显微镜下观察细胞形态,抗纤维连接蛋白抗体免疫细胞化学染色进行细胞鉴定。利用自制周期性压力培养装置模拟体内高血压,对心肌成纤维细胞进行干预,随机分为8组:(1)空白对照组(C):大气压下培养;(2)高静水压组(HHP):160mmHg压力下培养;(3)CT-1正义寡核苷酸组(SODN):160mmHg压力培养下,加入终浓度为10μmol/L的CT-1正义寡核苷酸; (4)CT-1反义寡核苷酸组(ASODN):160mmHg压力培养下,加入终浓度为10μmol/L的CT-1反义寡核苷酸; (5) Jak-STAT3阻断剂(AG490)组:160mmHg压力培养下,加入终浓度为25μmol/L的AG490; (6) MEK-ERK1/2阻断剂(PD98059)组:160mmHg压力培养下,加入终浓度为20μmol/L的PD98059; (7) PI3-K阻断剂(LY294002)组:160mmHg压力培养下,加入终浓度为10μmol/L的LY294002;(8)助溶剂二甲亚砜(dimethyl sulphoxide,DMSO)组:160mmHg压力培养下,加入终浓度为100mg/ml×10-3的DMSO。MTT法检测细胞增殖,STAT3、ERK1/2和PI3-K表达和活性通过RT-PCR和Western Blot分析测定。结果:(1)与空白对照组相比高静水压组明显促进心肌成纤维增殖(0.153±0.011 vs 0.115±0.012,P<0.05), CT-1ASODN能抑制高静水压所致的细胞增殖(0.132±0.013vs 0.153±0.011,P<0.05)(,2)CT-1ASODN组STAT3、ERK1、ERK2和PI3-KmRNA表达水平明显低于高静水压组(0.452±0.015 vs 0.855±0.012,P<0.05)、(0.355±0.042 vs 0.553±0.061,P<0.05)、(0.489±0.044 vs 0.647±0.051,P<0.05)、(0.486±0.060 vs 0.635±0.062, P<0.05);STAT3、ERK1和PI3-K蛋白表达明显低于高静水压组( 2.09±0.25 vs 2.47±0.28,P<0.05)、(1.13±0.19 vs 1.61±0.22,P<0.05)、(1.25±0.23 vs1.71±0.25 ,P<0.05)。(3)AG490组明显减弱高静水压的促增殖作用(0.118±0.018 vs 0.155±0.010,P<0.05)并且增加ERK1蛋白表达(1.85±0.18 vs1.45±0.23,P<0.05)。(4)PD98059组增强高静水压的促增殖(0.185±0.011vs 0.155±0.010,P<0.05)并且增加STAT3蛋白表达(1.83±0.23vs 1.58±0.22,P<0.05)。(5)LY294002干预后对高静水压的促增殖作用无影响( 0.157±0.015 vs 0.155±0.010,P>0.05);(6)SOND (0.151±0.010 vs 0.154±0.011 P>0.05)和DMSO组(0.110±0.015 vs 0.113±0.012 ,0.141±0.017 vs 0.155±0.010,P>0.05)与对照组相比心肌成纤维细胞增殖无明显差别。结论:(1)在成纤维细胞增殖中,CT-1激活STAT3、ERK1/2及PI3-K三条信号通路。(2)CT-1在高静水压下促心肌成纤维细胞增殖作用主要通过STAT3通路;ERK1/2通路起负向调节作用;PI3-K没有参与CT-1促心肌成纤维细胞增殖作用。(3)STAT3与ERK1/2之间的交汇作用有助于CT-1产生适当的心肌成纤维细胞增殖。