海蜇胶原抗氧化肽的制备分离、结构解析及活性研究

来源 :哈尔滨商业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sargelee
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海蜇是一类食源性生物,含有丰富的胶原蛋白,其可经水解形成能直接被人体肠道所吸收的肽,具有较强的抗氧化作用。本文首先对海蜇胶原蛋白进行提取及结构特性研究,其次对胶原抗氧化肽进行制备、结构特性、分离鉴定以及抗氧化活性研究,旨在为寻找天然抗氧化剂提供实验数据支撑。具体研究内容及实验结果如下:(1)利用盐酸-胃蛋白酶法可成功从海蜇中提取到高纯度Ⅰ型胶原蛋白,其亚基结构为[α1(Ⅰ)]3。海蜇胶原蛋白中含有15.94%的亚氨基酸,且甘氨酸含量最高(25.99%),不含半胱氨酸和色氨酸。热收缩温度为43.79℃,热稳定性较好。海蜇胶原蛋白分子排布紧凑,具有较完整的三螺旋结构,且微观呈多层聚集、以纤维为主的无规则网状结构。(2)海蜇胶原抗氧化肽酶解工艺优化试验结果表明,胰蛋白酶为最适用酶,酶解条件为温度41.0℃、时间5.9 h、pH 7.9、酶添加量8.5 u/mg。该条件下,海蜇胶原抗氧化肽的活性与其质量浓度呈正相关,Fe3+还原力最大吸光度为0.4125,DPPHs·、·OH、ABTS+·自由基的IC50值分别为32.28、3.12、0.74 mg/mL。结构特性研究结果表明,海蜇胶原抗氧化肽主要为1000 Da以下的肽段,其芳香族氨基酸、疏水性氨基酸以及必需氨基酸含量均明显高于酶解前的胶原蛋白。酶解作用使胶原蛋白原有的三股螺旋结构遭到破坏,分子结晶度下降,有序程度减弱,微观呈不规则的碎片状结构。(3)利用超滤、Sephadex G-15 凝胶色谱、Nano-LC-ESI-Q-Orbitrap-MS/MS 和Denovo技术从海蜇胶原抗氧化肽中分离鉴定并筛选得到10条氨基酸序列符合抗氧化肽特征的肽段,分别为 YLGPK、YGLPNLK、YAPFD、AYPNM、FPLP、PNLGAPGS、VGDLGPR、VPLP、LVVHYP、LVGDLGPR。(4)对10条肽段进行抗氧化活性测定与比较。化学抗氧化实验表明,YAPFD具有最大的DPPH·和·OH自由基清除率,LVVHYP具有最大的ABTS+.自由基清除率和Fe3+还原力,不同氨基酸序列的肽段间既存在着协同作用也存在拮抗作用。HepG2细胞抗氧化实验表明,AYPNM对ABAP诱导的脂质自由基具有最强的清除力,LVGDLGPR则对H2O2诱导的ROS具有最强的清除力。
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