动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)引起的心血管疾病(cardiovasculardisease，CVD)已成为威胁人类健康的主要疾病之一，其患病率与死亡率居高不下。升高的甘油三酯(triglycerides，TG)和低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C)水平是AS的危险因素。在过去的几十年中，许多关于CVD干预研究都是关注于如何降低LDL的水平。然而，最近的研究表明，血清高密度脂蛋白(high-density lipoprotein，HDL)水平与AS的发病危险呈负相关关系，并独立于血清TG和LDL的水平。因此升高HDL水平是治疗AS的一项重要策略。　　 HDL的抗AS作用可涉及多种机制，如抗氧化、抗炎和抗血栓等，但其最主要的作用机制在于参与胆固醇的逆向转运(reverse cholesterol transport，RCT)过程。RCT是指体内多余的胆固醇从外周组织(如巨噬细胞、泡沫细胞、AS斑块等)通过HDL转运回肝脏代谢，以胆盐或者粪胆固醇的形式排出体外的过程。RCT的效率依赖于巨噬细胞胆固醇外流、卵磷脂胆固醇酰基转移酶(lecithin cholesterol acyltransferase，LCAT)、胆固醇酯转运蛋白(cholesterylester transfer protein，CETP)和肝脏通过B类I型清道夫受体对于HDL携带的胆固醇酯的选择性摄取、代谢等过程。这些因素都决定了HDL发挥功能。　　 饮食干预(包括膳食模式和膳食组分等)是防治AS的一项重要策略。自然界的一些植物性食物中，存在着大量的非营养性生物活性物质或称植物化学物，具有独特的健康促进和疾病防治等作用。大量的研究表明，植物化学物具有预防AS的有益作用。其中，花色苷(anthocyanin)就是这样一类具有防治疾病作用的植物化学物。花色苷属于多酚类化合物，是一类在自然界广泛存在的水溶性色素。已证实富含花色苷的食物提取物在体外具有抗氧化特性。近年来的研究表明，花色苷在细胞和动物模型都具有广泛的生物学活性，比如抗氧化，抗炎，抗AS，改善血脂、和抗肿瘤等。在动物模型(包括膳食诱导和遗传型的高脂动物模型)，补充富含花色苷的食物或其提取物都可以降低血清TG、总胆固醇(total cholesterol，TC)和非HDL-C水平，以及升高血清HDL-C和载脂蛋白A I(apolipoprotein A I，apoA I)水平。进一步研究表明，花色苷在体外可以促进小鼠巨噬泡沫细胞的胆固醇外流，这也可能是花色苷发挥改善血脂作用的一条可能途径。　　 人类的脂质代谢和啮齿类动物存在许多差异。因此，花色苷在人类是否具有同样有益的改善血脂的作用，还需要进一步的研究。本课题拟采用从越橘和黑加仑提取到的纯化花色苷作为干预因素，观察对于血脂异常患者血脂及脂代谢酶(LCAT和CETP)的影响，并对可能的机制进行探讨，以进一步明确花色苷在防治AS及心血管疾病中的应用价值。　　 研究对象和方法：　　 1.干预材料　　 花色苷胶囊(Medox)和空白安慰剂胶囊均由挪威polyphenols AS公司提供，采用统一包装。花色苷胶囊中的花色苷由越橘(Vaccinium myrtillus)和黑加仑(Ribes nigrum)中提取，包括17种天然花色苷，总含量为80mg。　　 2.研究对象　　 本课题在广州市多个社区以招募志愿者的形式进行研究。研究对象纳入标准如下：　　 入选标准为：①年龄40～65岁，广州市常住居民；②符合我国“血脂异常防治建议”对于原发性高脂血症诊断标准中的2项及以上：空腹血清TC≥200mg/dL(5.2 mmol/L)；TG≥150mg/dL(1.7mmol/L)；LDL-C≥120 mg/dL(3.1mmol/L)；HDL-C≤35 mg/dL(0.9mmol/L)；③要求进餐规律，较少外出就餐，近三个月体重稳定。　　 排除标准为：①患有临床诊断的心脑血管疾病，各种严重的慢性疾病，肝肾功能不全；②试验前一个月内曾患有急慢性感染性疾病、外伤或手术；③现正服用或近半年内曾服用过任何影响血脂的药物。　　 剔除标准为：①试验期间，研究对象发生由于非干预因素导致的严重疾病；②连续3天未服用干预保健品者。　　 本课题获得中山大学伦理委员会批准。所有研究对象均签署知情同意书。　　 3.试验设计　　 本研究采用随机、双盲、对照试验。参考文献确定花色苷的干预剂量为320mg/d。研究所需的样本量大小依据预实验的结果确定为120例。筛选符合研究对象纳入标准的志愿者120名，按照年龄采用匹配随机化的方式分为两组，花色苷组和对照组，每组各60人(21名男性和39名女性)。花色苷组研究对象给予花色苷胶囊，每日两次，每次两粒，于早饭和晚饭半小时后服用，每日服用花色苷的剂量为320mg；对照组研究对象给予空白安慰剂胶囊，服用方法与花色苷胶囊相同。干预试验共12周，期间研究对象保持原来的饮食生活习惯，每4周随访1次，回收剩余胶囊，询问并记录服用胶囊的情况以及有无出现不良反应及种类，并发放下一阶段的胶囊。　　 4.研究指标　　 (1)问卷调查　　 干预前(0周)和干预结束时(12周)，所有研究对象进行膳食问卷调查(包括3天24小时回顾性调查表和食物频数表)，基本情况和生活方式调查。由统一培训的调查员询问研究对象，并根据其回答如实填写问卷。3天24小时回顾性调查表包括2个工作日和1个周日，采用CDGSS3.0软件分析，以评价研究对象的能量和营养素摄入情况。个人基本情况调查包括对象的一般情况、既往史、家族史、服药史等，用于研究对象的筛查。生活方式调查包括吸烟、饮酒、运动习惯等。　　 (2)体格测量　　 干预前(0周)和干预结束时(12周)，以及每次随访(4周和8周)时，所有研究对象均测量身高、体重、腰臀围和血压，计算体质指数(bodymass index，BMI)和腰臀比(waist-to-hip ratio，WHR)。　　 (3)尿液中花色苷及其代谢物检测　　 干预前(0周)和干预结束时(12周)，研究对象均于清晨空腹收集尿液10ml，立即用2.5％体积的6mol/L HCl酸化。加入内标(矢车菊素-3，5-O-β-葡萄糖苷)后，采用固相萃取方法提取纯化尿样中的花色苷，HPLC法检测样品中的花色苷及其代谢物的种类和含量。　　 (4)血液指标检测　　 干预前(0周)和干预结束时(12周)，研究对象均于清晨空腹采集肘前静脉血，分离血清或血浆用于血液指标检测。　　 1)安全性指标检测　　 2)血脂和血糖浓度检测　　 3)血浆脂代谢酶水平检测　　 4)血清在体外促进J774小鼠巨噬细胞胆固醇外流的能力检测　　 5.细胞实验　　 人HepG2细胞以3.5×105细胞/孔的密度接种于6孔板，添加10％FBS的RPMI1640培养基孵育24小时。然后，采用不同浓度(0，1,5，10，20，40μmol/L)的矢车菊素-3-o-β-葡萄糖苷(cyanidin3-O-β-glucosides，Cy-3-G)的无血清培养基孵育细胞24小时。收集细胞培养液分为两部分：一部分直接采用ELISA法测定CETP的浓度；另一部分立即添加0.05％ NaN3，0.5 IU/ml Aprotinin和1mMEDTA，pH7.4，离心除去细胞沉淀后，采用荧光法检测CETP活性。收集细胞采用Trizol法提取mRNA，实时定量PCR法检测CETP mRNA表达水平。　　 研究结果：　　 1.试验完成情况　　 2.研究对象的一般情况　　 3.膳食及营养素摄入情况　　 4.人体测量指标　　 5.尿液中花色苷的代谢情况　　 6.血常规和肝肾功能指标　　 7.血脂、血糖和胰岛素水平　　 8.脂代谢酶水平　　 9.血脂和脂代谢酶的关系　　 10.胆固醇外流水平　　 11.体外花色苷对于CETP的影响　　 结论：　　 1.在血脂异常患者，花色苷胶囊干预12周后，能够显著升高其血清HDL-C水平和降低血清LDL-C水平，其作用机制与花色苷抑制血浆CETP的浓度和活性有关。　　 2.花色苷胶囊干预后，研究对象的血清在体外促进J774巨噬细胞的胆固醇外流能力增强，并与血清中升高的HDL-C水平呈正相关关系。