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桃是我国重要的经济树种之一,油桃是重要栽培种,近年来桃树病毒的侵染日益增强,成为影响桃树生长及果品质量的重要因素。本研究首先利用NGS,RT-PCR技术和遗传进化分析方法,比较不同症状油桃样品中的病毒群体差异,鉴定我国新发病毒,扩增基因组全长,研究了病毒/类病毒的复合侵染在宿主症状表现中的作用,分析了引起病害症状的主要病毒群体,为防治油桃病毒病提供理论依据;其次,对我国新发现的三种病毒建立了简便、经济、快速和准确的多重RTPCR检测体系,为田间样品的大规模调查提供了便利。1.利用NGS技术和系统发育分析的方法,比较分析了两个品种不同症状的五棵油桃树中的病毒群体,并利用RT-PCR技术在26个具有相似症状的样品中进行了验证。结果表明,病毒群体数与品种和症状紧密相关,5棵树分别鉴定到1-9种病毒或类病毒。果面有痘状凸起症状的样品T02(油桃1233)的病毒群体数最多,包含5个科中的9种病毒/类病毒,并在我国李属植物上首次发现PeVD的侵染;在果面凹凸不平症状的样品T04(中油4)中鉴定到3个科中的4种病毒/类病毒,在1个花叶症状样品T05中仅鉴定到1种类病毒PLMVd。综合不同样品的病毒群体NGS数据和遗传进化分析结果表明,T02样品症状可能是由长线形病毒科的PBNSPaV、乙型线形病毒科的CGRMV和CNRMV以及黄症病毒科的NSPaV之间相互作用的结果,并且推测CGRMV和CNRMV在该症状表达中充当“辅助病毒”的作用。T04样品症状可能与NSPaV和APV2的共侵染有关。此外,PLMVd的遗传进化分析结果表明,有症状的单棵树中存在着不同的PLMVd序列变体,推断叶片症状可能与不同的PLMVd序列变体共侵染有关。2.利用植物nad5基因作为内参,建立了一套可同时检测三种新发病毒(PaLV,PeVD和NSPaV)的多重(m)RT-PCR检测体系。以感染三种病毒的田间样品作为材料,筛选出三对特异性引物,并对引物浓度、退火温度等条件进行优化,评估了mRT-PCR的灵敏度,构建了可以在单一反应中同时检测三种病毒的mRT-PCR检测体系,并用所构建的mRT-PCR检测体系检测了田间21棵桃树叶片中的病毒。结果表明,本研究开发的mRT-PCR检测体系简便、经济、快速和准确,有助于田间样品的大规模调查。3.利用RT-PCR和RACE技术对中国分离物T04进行NSPaV全长基因组的扩增,结果显示,NSPaV-T04的基因组大小为4991 nt,与GenBank中登录的几条分离物基因组序列结构相同,编码四个开放阅读框。序列比对结果表明,中国分离物NSPaV-T04与美国分离物NSPaV/12P42(KT273410)的序列相似性最高,对ORF的几个蛋白编码区的核苷酸和氨基酸序列分析表明,ORF1(RdRp P1)的变异较大,ORF3(CP)的相似性最高。系统发育分析也表明,NSPaV-T04与NSPaV/12P42的亲缘关系最近。这是我国NSPaV全长基因组序列的首次报道。