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目的检测婴幼儿CHD患者、新生儿CHD患者、胎儿CHD患者母体与各同期可比性对照血浆中miR-363-3p、miR-194-5p、miR-222-3p和let-7e-5p的表达水平,探讨4种血浆miRNAs在不同时期用于CHD辅助诊断的可行性,并且评估母体血浆miRNA诊断胎儿先心病的价值,旨在为今后临床上关于先天性心脏病产前产后诊断方法的补充和完善提供有效参考。方法1.研究对象:于小儿心脏外科收集就诊和治疗的1～3岁CHD患者80例作为婴幼儿病例组,并选取同期在该医院体检中心行正常体格检查的婴幼儿89例作为对照组;于新生儿科收集就诊和治疗的CHD患儿92例作为新生儿病例组,选取同期在该医院体检中心行正常体格检查的新生儿100例作为对照组;于妇产科收集因先心病终止妊娠的胎儿（18-20周）及其母亲13例作为胎儿病例组,并选取同期因其他原因终止妊娠的胎儿及其母亲9例作为胎儿对照组。2.引物设计与合成:miR-363-3p、miR-194-5p、miR-222-3p、let-7e-5p及内参基因U6的引物设计与合成由上海Gene Pharma制药技术有限公司提供。3.研究方法:采集研究对象空腹静脉血（胎儿采集脐带血）标本,分离血浆,提取血浆总RNA,逆转录合成c DNA,实时荧光定量PCR测定miR-363-3p、miR-194-5p、miR-222-3p、let-7e-5p的CT值。各miRNAs相对表达水平的计算采用2-（?）（?）CT法,具体计算方法为:（?）CTmiR=CTmiR-CTU6,（?）（?）CTmiR=（?）CTmiR-（?）CTmiR（基准品）。4.统计学分析:采用SPSS 24.0软件进行统计学分析。定性资料组间比较采用四格表资料的X2检验;定量资料用x±s、M（QR）描述,组间比较采用t检验或Mann-Whitney U秩和检验。相关分析采用Spearman秩相关或Pearson积差相关。规定P<0.05为差异有统计学意义。利用ROC曲线评价血浆miRNAs对CHD诊断的有效性,通过计算曲线下面积、灵敏度、特异度以及正确指数等一系列指标来评价诊断价值的大小,确定CHD诊断中miRNAs相对表达水平的最佳临界点。利用logistic回归分析联合多种差异表达miRNAs建立多指标诊断模型,构建联合诊断分子标签,评价多个指标联合诊断CHD的有效性和价值。结果1.婴幼儿CHD患者血浆中miR-363-3p、miR-222-3p、let-7e-5p表达显著下调,3种差异表达miRNAs对应的ROC曲线下面积分别为0.819,0.743,0.745。多指标logistic回归分析发现3种血浆miRNAs（miR-363-3p、miR-222-3p、let-7e-5p）联合组成分子标签可提高婴幼儿CHD的诊断效能,获得的诊断价值为0.892,当截断值取值0.583时,对应的灵敏度和特异度分别为0.844,0.811。将miR-363-3p、miR-222-3p、let-7e-5p两两组合,再次对诊断模型进行优化,发现miR-363-3p和miR-222-3p联合诊断AUC为0.867,截断值为0.585时,对应灵敏度和特异度分别为0.781,0.811;miR-363-3p和let-7e-5p联合诊断AUC为0.865,当截断值为0.542时,对应灵敏度与特异度与miR-363-3p和miR-222-3p联合时相同;miR-222-3p和let-7e-5p联合诊断AUC为0.815,截断值为0.552时,灵敏度和特异度均为0.719。2.新生儿CHD患者血浆中miR-194-5p、miR-222-3p、let-7e-5p表达水平下调,3种差异表达miRNAs对应的ROC曲线下面积分别为0.805,0.786,0.834。多指标logistic回归分析发现3种血浆miRNAs（miR-194-5p、miR-222-3p、let-7e-5p）联合诊断ROC曲线下面积可高达0.900以上,具体AUC值为0.909,当最佳临界点取值0.486时,该新生儿CHD诊断试验对应的灵敏度和特异度均为0.844。从卫生经济学角度考虑,将miR-194-5p、miR-222-3p、let-7e-5p中的任意两个联合,评估2种miRNAs联合替代3种miRNAs联合用于新生儿CHD辅助诊断的潜能。结果发现血浆miR-194-5p和miR-222-3p联合组成的分子标签诊断价值为0.879,最佳临界点取值0.420时,灵敏度为0.875,特异度为0.719;miR-194-5p和let-7e-5p联合的诊断价值最高,为0.886,当最佳临界点取值0.497时,对应灵敏度和特异度分别为0.813、0.781,此时被miR-194-5p和let-7e-5p联合组成的分子标签诊断为先心病的新生儿中,患CHD的可能性可高达78.8%;miR-222-3p和let-7e-5p联合的诊断价值为0.858,最佳临界点取值0.405时,灵敏度为0.813,特异度为0.719。3.胎儿CHD患者及母体血浆中miR-194-5p、let-7e-5p表达显著下调,2种miRNAs在胎儿脐带血浆与母体血浆表达水平均呈现高度正相关。母体血浆miR-194-5p和let-7e-5p用于胎儿CHD诊断的ROC曲线下面积分别为0.761、0.774。利用非条件logistic回归分析将两种miRNAs联合,诊断效能明显提高,诊断价值可高达0.915,当截断值为0.629时,对应的灵敏度和特异度分别为0.923、0.889。结论1.血浆miR-363-3p、miR-222-3p、let-7e-5p具有作为婴幼儿CHD诊断标志物的潜能,且miR-363-3p和miR-222-3p联合或miR-363-3p和let-7e-5p联合可获得比单个miRNAs更高的诊断价值,同时也基本可达到3种血浆miRNA（miR-363-3p、miR-222-3p、let-7e-5p）联合时的诊断效能,可能具有临床应用的价值。2.血浆miR-194-5p、miR-222-3p、let-7e-5p或可作为新生儿CHD诊断的潜在标志物,并且3种miRNAs（miR-194-5p、miR-222-3p、let-7e-5p）联合或者是任意两种联合均可获得相较于单个miRNAs诊断更高的价值,特别是miR-194-5p和let-7e-5p联合用于新生儿CHD辅助诊断获得的诊断效能与3种miRNAs联合时基本相同。3.母体血浆miR-194-5p、let-7e-5p可能具有作为胎儿CHD诊断标志物的潜能,且这两者联合组成的分子标签能够更有效的区分胎儿CHD患者和对照人群。