小鹅瘟病毒PCR检测方法的建立和山东济宁地区小鹅瘟流行病学调查

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小鹅瘟是由鹅细小病毒引起的一种急性传染病,主要侵害30日龄以内的雏鹅和雏番鸭,以发病急,死亡率高,传播快为特点。发病率和死亡率随着日龄的增加而下降,主要侵害7日龄以内的雏鹅和雏番鸭,根据发病情况分为3种类型,最急性型,急性型和亚急性型(殷震and刘景华,1997)。发病鹅主要以肠粘膜脱落,坏死,肠栓,脱水等为症状。1966年,匈牙利学者Derszy用鹅胚也分离到病毒,他是国外第一个用鹅胚分离到病毒的人,并于1967年对本病进行了详尽的描述,但当时他却把该病误认为流感,直到1971年Schettler确定这种病是由细小病毒引起。1978年建议把这种病称为鹅细小病毒感染,1974年世界禽类学会为纪念Derzsy的先期工作而将此病命名为Derzsy氏病(Derzsy D,1975)。1995年Zadori等首次报道了GPV全基因序列,并将其与番鸭细小病毒基因序列进行了同源性比较(Zadori Z,1995)。本病大流行具有一定周期性。在大流行以后当年余下的鹅群都获得了主动免疫,使次年的雏鹅具有天然被动免疫力,故本病不会在同一地区连续两年发生大流行。由此可见,本病的发病率和死亡率一方面和日龄有关,另一方面取决于亲代母鹅的特异性抗体水平。免疫预防是控制小鹅瘟的重要措施。目前已建立了PCR、ELISA、间接免疫荧光技术、微量中和试验等检测小鹅瘟的方法,但是这几种检测方法均需特殊的仪器设备,且耗时长,不适于在基层推广应用。因此,建立一种更加快速、灵敏的病毒检测方法迫在眉睫。本研究建立的聚合酶链式反应,具有操作简单,快速,适合基层推广的特点。近年来小鹅瘟在我国的一些省、市、自治区均有流行,给养鵝业造成严重的危害,同时也给饲主带来巨大的经济损失,因此受到国内外学者和工作者的广泛关注。本研究通过工作之便,对所在地区鹅养殖现状和小鹅瘟发病情况做了相应的调查,并对其流行情况做了汇总,以期对养鹅业小鹅瘟疾病的发生做出相关的预防措施。本研究根据GENBANK上发表的小鹅瘟的vp3的序列信息,设计了一对特异性引物,通过优化各种条件,最终扩增出与预期片段大小一致的314bp的核酸片段,在通过相应的特异性实验发现此引物仅能扩增出小鹅瘟的特异片段,能够用来检测小鹅瘟的发生。本研究中对于分离到的10株病毒进行测序分析,结果显示分离株之间,同源性最高达100%,最低也在95.2%以上,说明小鹅瘟病毒的扩增片段核苷酸变异很小,VP3是小鹅瘟的主要抗原,所以本研究对于免疫预防具有指导性的意义。依据本研究中调查的小鹅瘟的发病日龄等基本信息,尤其每个鹅场的免疫预防程序进行了调查,发现小鹅瘟的发病日龄集中在12-2月份之间,根据小鹅瘟的发病情况,对其免疫程序作出了相应的调整,结果显示小鹅瘟的发病概率降低了,说明合适的免疫程序是预防该病的比较有效的措施。
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