论文部分内容阅读
目的：以高脂饲料诱导的肥胖易感和肥胖抵抗SD大鼠为研究对象，研究下丘脑脂肪酸代谢是否通过食欲调节导致肥胖易感性差异的产生和胰岛素抵抗，并探讨普通饲料干预对高脂饲料喂养的大鼠下丘脑脂肪酸代谢和胰岛素抵抗的影响。方法：（1）肥胖模型的建立：选取初始体重为120-140g的55只雄性清洁级SD大鼠为研究对象，SPF级动物房适应性喂养一周，按体重随机分为高脂饲料组（HF，45只）和普通饲料对照组（Control，10只）。由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供基础饲料；每100g高脂饲料由基础饲料60g、蛋黄粉13g、猪油15g、干酪素10g、白糖2g构成。普通饲料和高脂饲料来自脂类的能量分别为13.68%和49.65%。喂养10周后，高脂饲料组中，分别以对照组平均体重加1.96倍标准差（χ+1.96s）和平均体重加1倍标准差（χ+s）为标准，体重大于前者的判定为饮食诱导肥胖（DIO）大鼠，体重小于后者的判定为饮食诱导肥胖抵抗（DIO-R）大鼠，体重介于两者之间的不纳入本次研究。实验期间各组大鼠自由的摄食和饮水，记录每天的进食量和每周的体重。动物房的温度（20±2）℃，相对湿度(50±10)%，明暗周期12:12（h）。（2）普通膳食干预：肥胖模型建立后，分别将DIO和DIO-R大鼠再随机分为两组，一组改为普通饲料喂养（DIO-CF与DIO-R-CF），即普通饲料干预组，一组大鼠继续高脂喂养（DIO-HF与DIO-R-HF），对照组继续普通饲料喂养，干预8周。分别在实验开始、10周与18周末隔夜禁食12小时后，采集尾血，离心之后取血清，-80℃冰箱保存以备后续检测相关指标。实验结束时，大鼠隔夜禁食12小时后断头处死，留取肝脏用于检测肝脏甘油三酯含量，留取全血，分离得到血清，用于测定总胆固醇、甘油三酯、葡萄糖、胰岛素、高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇的水平。迅速分离下丘脑置液氮冻存，5分钟后移至-80℃冰箱保存，用于RNA提取。同时分离肾周脂肪和睾周脂肪并称重。用实时定量-聚合酶链反应（Real time-PCR）的方法测定下丘脑FAT/CD36、CPT-1c、ACCβ和GPR41基因表达水平。结果：（1）10周后，高脂饲料组中肥胖易感大鼠（DIO）为18只，肥胖抵抗大鼠（DIO-R）为12只，大鼠肥胖和肥胖抵抗的发生率分别为40.0%和26.6%。DIO组体重显著高于DIO-R组与Control组。DIO-R组与Control组相比差异无统计学意义。DIO组大鼠能量摄入量显著高于DIO-R和Control组，DIO-R组与Control组相比差异无统计学意义。（2）普通饲料干预8周后，DIO-CF组大鼠体重和内脏脂肪含量显著低于DIO-HF组，DIO-R-CF组的体重与DIO-R-HF组相比差异无统计学意义，但DIO-R-CF组大鼠内脏脂肪含量显著降低。DIO-CF组、DIO-R-CF组的食物摄入量分别比其对应的高脂组增多，但其能量摄入量低于DIO-HF组与DIO-R-HF组。（3）DIO-HF组大鼠下丘脑FAT/CD36mRNA表达水平显著高于DIO-R-HF组和Control组（P<0.05），普通饲料干预后，DIO-CF组显著低于其相对应的高脂组（P<0.05），DIO-R-CF组与其相对应的高脂组和Control组相比差异无统计学意义。DIO-HF组大鼠下丘脑CPT-1c mRNA的表达水平显著低于DIO-R-HF组、DIO-R-CF组和对照组（P<0.05），DIO-CF组显著高于DIO-HF组及其他三组（P<0.05）。DIO-HF组大鼠下丘脑ACCβ mRNA的表达水平与DIO-R-HF组及对照组相比差异无统计学意义，但显著低于DIO-CF组和DIO-R-CF组（P<0.05）。DIO-HF组GPR41mRNA的表达水平显著高于DIO-CF组（P<0.05），但与DIO-R-HF组、DIO-R-CF组和对照组相比差异无统计学意义。结论：（1）高脂饲料喂养10周后可以诱导SD大鼠肥胖易感性差异的产生，普通饲料干预可显著降低肥胖易感大鼠体重和脂肪蓄积量。（2）高脂饲料喂养的肥胖易感大鼠FAT/CD36基因表达水平升高，而肥胖抵抗大鼠的FAT/CD36基因表达接近正常对照组。这表明FAT/CD36可能与下丘脑控制食物摄入和能量平衡及高脂饮食诱导肥胖易感性差异密切相关。对肥胖大鼠进行普通饲料干预可以使FAT/CD36基因表达恢复正常。（3）高脂饲料诱导的肥胖与肥胖抵抗大鼠继续给予不同能量密度的饲料后，下丘脑脂肪酸代谢相关的基因CPT-1c、ACCβ、GPR41表达均有不同。表明下丘脑脂肪酸代谢可能与食物摄取及能量平衡的调节有关。