猪链球菌2型(Streplococcus suis type 2，SS2)是危害养猪业的重要病原菌，同时也给从业人员带来严重的威胁。根据荚膜多糖(capsular polysaccharide，CPS)抗原性的不同，可将其分为35个血清型(1～34，1／2)。主要致病血清型为SS1、SS2、SS1╱2、SS7、SS9和SS14，其中以SS2流行最广、致病性最强。已知的与致病性相关的毒力因子主要有荚膜多糖、溶菌酶释放蛋白(muraminidase releasedprotein，MRP)、胞外因子(extracellular factor，EF)、溶血素(suilysin，Sly)等，但该菌致病机制不明，新的毒力因子有待发掘。本实验对普遍存在于革兰阳性菌中的重要膜转运蛋白Sortase进行了初步功能研究，证实Sortase编码基因srtA及其类似蛋白在SS2中的存在；同时构建了srtA基因的缺失株，通过动物实验证实缺失株毒力与野毒株相比有所下降；成功克隆并原核表达了05ZYH33的Sortase蛋白，重组蛋白具有一定的免疫原性。1猪链球菌2型强毒株srt基因同源序列分析及srtA的表达借助生物信息学软件对SS2人源强毒力株05ZYH33基因组序列进行同源性检索，确定05ZYH33基因组编码Sortase及其相关家族蛋白的数量和分布情况，得到6个与Sortase编码基因同源的序列，其中SrtA及Sortase-like归属sortase家族中的A组，SrtBCD和SrtE属B组，1个sortase-like基因为国内外首次发现。将srtA基因克隆于原核细胞E．coli，DH5α中高效表达，重组表达产物可与SS2的兔多抗血清发生特异性反应。此外，制备Sortase鼠多抗血清，间接ELISA检测的鼠多抗血清效价达1：6400。2猪链球菌srtA基因敲除突变株的构建及其特性研究构建中间为壮观霉素抗性基因，两侧为srtA编码基因上、下游同源序列的基因敲除载体，通过同源重组构建srtA基因缺失的突变株：PCR和Southern杂交鉴定突变株，筛选到1株srtA编码基因完全被壮观霉素抗性基因替代的突变株05ZYH33△srtA，体外观察突变株05ZYH33△srtA的基本生物学性状，发现其革兰氏染色及溶血性与野毒株相比没有明显变化，动物实验证实srtA缺失株的毒力与野毒株相比有所下降。为进一步探讨猪链球菌2型分子致病机理奠定了研究基础．3猪链球菌2型Sortase蛋白单克隆抗体的制备以表达、纯化去除跨膜区的Sornase蛋白为免疫原，常规免疫BALB／c小鼠，采用B淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合，用纯化的Sortase蛋白包被的间接ELIS人方法反复筛选和多次克隆化培养，筛选出1株特异分泌鼠抗Sonase蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株3D2；Wlestern blot分析显示，该单抗与全菌蛋白可产生两条特异性反应带。