1. TRAP蛋白参与长链不饱和脂肪酸杀伤金黄色葡萄球菌的机制研究；2.假定蛋白VrX参与金黄色葡萄球菌天然耐药的机制研究金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,金葡菌)是一种常见的革兰氏阳性致病菌,广泛分布于自然界中,通过飞沫、接触等途径传播并引起多种疾病。当金葡菌侵入机体时,机体会通过补体系统、吞噬细胞、不饱和脂肪酸等多种防御系统清除入侵细菌。同时金葡菌自身在感染机体的过程中,也会表达多种分子对抗机体的清除作用。近年来由于抗生素滥用,导致了多种耐药性金葡菌的出现,耐药金葡菌引发的感染是临床面临的棘手难题。本论文主要针对以下两个内容展开了相关的研究,具体如下：①TRAP蛋白参与长链不饱和脂肪酸杀伤金葡菌的机制研究；②假定蛋白VraX参与金葡菌天然耐药的机制研究。本研究的第一部分为TRAP蛋白参与长链不饱和脂肪酸杀伤金黄色葡萄球菌的机制研究。长链不饱和脂肪酸一般指≥C16,含有一个以上双键的脂肪酸。相关研究表明,该类脂肪酸是天然免疫系统中重要的组成成分,具有抗金葡菌感染的能力。TRAP是金葡菌致病性相关的蛋白分子,目前关于它的生物学功能存在争议,其确切功能尚不清楚。该部分内容具体如下：1.△traP对亚油酸的敏感性检测：我们实验室前期通过基因同源重组的方法获得了traP基因的缺失突变株(△traP),当其与亚油酸进行共孵育培养时,与野生型菌株相比,其存活率明显降低。通过基因芯片对比分析我们发现在△traP中与脂代谢相关联的基因fadD的mRNA水平明显降低。1.AfadD对亚油酸的敏感性检测：我们通过基因同源重组的方法获得了fadD基因缺失突变株(△fadD).进一步的实验结果发现,△fadD对亚油酸敏感性也明显增强。我们在△traP中回复fadD的水平,但其对亚油酸的敏感性未得到回复。3.TRAP蛋白通过与FadD蛋白相互作用参与亚油酸杀伤金葡菌的过程：通过免疫共沉淀实验及质谱鉴定的方法,我们发现FadB和FadD可能是TRAP的结合蛋白。进一步的ELISA实验结果表明只有FadD蛋白能够特异与TRAP蛋白结合。这表明TRAP蛋白通过与FadD蛋白相互作是其影响亚油酸对金葡菌杀伤的主要机制。本论文的第二部分为假定蛋白VraX参与金黄色葡萄球菌天然耐药的机制研究。天然耐药是指在抗生素作用下,抗生素敏感细菌中的一部分可以存活和繁殖,成为接收外来耐药基因的载体。研究表明抗生素作用下,金葡菌中的多种分子异常表达对抗药物的杀伤作用。通过文献调研发现,多种抗生素处理后金葡菌假定蛋白VraX的水平明显升高(>20倍)。本部分研究中,我们主要探索VraX参与金葡菌天然耐药的机制研究,具体内容如下：1.VraX蛋白与金葡菌的天然耐药明显相关：我们通过基因同源重组的方法获得了vraX基因的缺失突变株(△vrax)。药物敏感性检测实验结果表明△vraX对多种抗生素敏感。2. RNaseⅢ调控金葡菌中vraX的水平：我们通过RNA-pulldown实验中证实RNaseⅢ能够结合vraX,基因芯片对比分析发现△RNaseⅢ中vraX的水平明显升高,我们利用RT-PCR及qRT-PCR验证这一结果。进一步的凝胶阻滞实验证实RNaseⅢ可以特异的结合vraX。同时降解实验表明,在Mg2+存在的条件下vraX可以被RNaseⅢ特异的降解。我们的结果提示RNaseⅢ能够结合并降解vraX。综上所述,我们发现金葡菌中的TRAP蛋白可以通过与FadD蛋白相互作用参与亚油酸对金葡菌的杀伤。同时,我们的研究结果表明VraX蛋白可能参与了金葡菌的天然耐药,并且RNaseⅢ可以影响其水平。以上研究将为抗金葡菌感染研究提供可能的药物靶点以及新的理论基础。本文图87幅,表2个,参考文献61篇。