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[目的] 本研究拟通过培养大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs),检测低氧下PASMCs腺苷A2bAR和PCNA mRNA表达情况,研究低氧对腺苷A2bAR的影响,运用PI3K特异性抑制剂LY294002处理细胞,探讨HIMF/PI3K/Akt通路对低氧诱导A2bAR表达的作用。 [方法] 1.采用组织块贴壁法原代培养PASMCs,免疫荧光法鉴定细胞;用真空压缩袋制作常压低氧培养细胞的模拟模型装置(氧浓度为2%),通过检测细胞增殖来验证该设计的可行性。 2.实验分组:设实验组[即低氧组(Hypoxia,H组)]和对照组[即常氧组(Normal,N组)],每组均设时间点为6h、24h、48h、72h。 3.用流式细胞术检测低氧6h、24h、48h、72h PASMCs增殖情况。 4.应用qRT-PCR法检测常氧和低氧6h、24h、48h、72h PASMCs A2bAR和PCNA mRNA的表达情况。 5.采用免疫荧光的方法,在激光共聚焦显微镜下观察PI3K特异性抑制剂LY294002在1umol/L、10umol/L、25umol/L、50umol/L浓度下对A2bAR在PASMCs上的表达影响。 [结果] 1.流式细胞术检测PASMCs增殖结果显示,培养6h、24h、48h、72h后常氧组和低氧组的PASMCs增殖差异性有统计学意义(P<0.05)。 2.qRT-PCR法检测常氧和低氧组A2bAR和PCNA mRNA表达显示,常氧组A2bAR和PCNA mRNA表达均呈现先上升后下降趋势(F=200.170,P<0.05;F=56.271,P<0.05),而低氧组呈现先上升再下降后上升趋势(F=102.729,P<0.05;F=172.038,P<0.05)。 3.激光共聚焦显微镜下观察到随着LY294002浓度的增加,常氧下A2bAR的荧光表达强度有逐渐下降趋势,但趋势极小,而低氧下A2bAR的荧光表达强度则有明显下降趋势。 [结论] 1.低氧可使PASMCs上腺苷A2bAR mRNA的表达发生变化。 2.低氧可通过HIMF/PI3K/Akt通路介导A2bAR的改变,从而为阐明低氧性肺动脉高压的发生机制提供一定的理论基础。