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本研究以长角血蜱Haemaphysalis longicornis Neumann孤雌生殖种群为研究对象,运用生物化学、免疫细胞化学等现代生物学研究方法,首次制备出长角血蜱孤雌生殖种群卵黄蛋白(vitellin, Vn)的多克隆抗体(polyclonal antibody, PcAb)和单克隆抗体(monoclonal antibody, McAb),并对所得的单抗做了一系列鉴定。通过双抗体夹心ELISA实验测定成蜱各时期内脏周脂肪体、腔壁脂肪体、血淋巴和卵巢中卵黄原蛋白(vitellogenin, Vg)或Vn的含量。上述研究对于深入阐明蜱类卵黄发生过程具有重要的科学意义。主要研究结果如下:1、用长角血蜱孤雌生殖种群卵黄蛋白免疫新西兰大白兔,取兔血清进行纯化,获得Vn的多克隆抗体。应用间接ELISA检测抗体效价,效价高达1:768000以上。2、用长角血蜱孤雌生殖种群卵黄蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,经3-4次克隆化筛选,获得7株能稳定分泌抗Vn的单克隆抗体,分别为1F6、2H6、3A9、4G11、4H1、5G11和6G2。3、经间接ELISA检测,单抗1F6、4H1、6G2的效价均在1:819200以上,单抗2H6、3A9、4G11、5G11的效价均在1:1638400以上。4、采用Sigma公司的mouse monoclonal antibody isotyping reagents测定抗体亚型,1F6、3A9亚型为IgG2a,2H6、4G11、5G11、6G2亚型为IgG2b,4H1亚型为IgG1。5、经夹心ELISA实验检测,7株单抗均具有高度特异性。6、4G11具有最高的效价和特异性。纯化的4G11效价在1:819200以上,其亲和常数为4.6×107,具有很强的亲和力。7、将纯化后的4G11进行SDS-PAGE分析,结果显示4G11的重链和轻链的分子量分别为55.8KD和20.9KD。8、将纯化后4G11进行Western blot分析,发现单抗4G11仅与卵黄蛋白9条亚基中的2个亚基发生免疫反应。9、应用双抗体夹心ELISA检测长角血蜱孤雌生殖种群成蜱各时期内脏周脂肪体、腔壁脂肪体、血淋巴和卵巢中Vg或Vn的含量。结果表明,血淋巴在饱血当天已经出现Vg,内脏周脂肪体和腔壁脂肪体在饱血当天也出现了Vg,但含量很低,卵巢在饱血后4天开始出现Vn,这说明长角血蜱孤雌生殖种群的卵黄发生过程可能是由脂肪体合成Vg,一经合成便迅速释放到血淋巴,Vg经血淋巴运输到卵巢,被发育中的卵母细胞吸收、沉积并加工成Vn,为胚胎发育提供充足的营养。