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第一部分:急性胰腺炎胰腺内、外分泌功能与结构的损伤及表面活性蛋白D在胰腺中的表达[目的]观察急性胰腺炎(AP)胰腺内、外分泌功能和结构损伤,以及表面活性蛋白D(SP-D)在胰腺中的表达。[方法]C57BL/6野生型(WT)小鼠80只,随机分为对照组(CON组),急性胰腺炎组(AP组)。每组再分为5个亚组即1d、3d、7d、15d及30d亚组,每亚组8只。采用蛙皮素诱导小鼠AP模型,AP后小鼠行糖耐量试验及观察小鼠血糖变化。各时间点分批剖杀小鼠,取血清及胰腺组织。观察AP后腺泡及胰岛细胞的病理变化及损伤后修复及再生情况,检测血清胰岛素水平及胰腺组织中AMY、SOX9、Insulin、NGN3及SP-D的表达。[结果]外分泌方面,AP后部分损伤的腺泡细胞去分化为SOX9+腺泡导管样细胞及腺泡导管样化生结构(ADM)的形成,AP 1d病理损伤最重及AMY表达最少,AP7d腺泡结构基本恢复。内分泌方面,AP后损伤的胰岛β细胞去分化为NGN3+β细胞且不表达胰岛素,AP 30d小鼠糖耐量受损,空腹血糖显著升高(P<0.05)。生理条件下,SP-D仅表达于胰岛及胰腺导管,AP时损伤的腺泡区去分化的腺泡细胞即SOX9+导管样细胞及形成的ADM表达SP-D。[结论]AP时部分损伤的腺泡细胞及胰岛β细胞可发生去分化,去分化的胰岛β细胞为AP后糖耐量受损及糖尿病的重要因素之一。SP-D不仅表达于胰岛及胰腺导管,AP时SP-D也在腺泡损伤区部分去分化的腺泡细胞即SOX9+导管样细胞和ADM中表达。第二部分:表面活性蛋白D对胰腺炎的保护作用[目的]探讨SP-D对AP胰腺损伤的保护作用。[方法]C57BL/6 WT和SP-D基因敲除(SP-D-/-)小鼠各32只,分别随机分为WT-CON(N=8)、SP-D-/--CON(N=8)、WT-AP及SP-D-/--AP,AP组再分为3个亚组即1d、3d、7d,各亚组8只。采用蛙皮素诱导小鼠AP模型,各时间点分批剖杀小鼠,取胰腺组织。观察胰腺病理损伤变化和ADM形成情况,并对胰腺行病理评分。检测胰腺组织中NF-κB、IL-1β、MPO等表达;TUNEL染色法检测胰腺中细胞凋亡。[结果]WT和SP-D-/-小鼠AP后1d胰腺病理损伤较重和炎症因子水平较高,3d和7d逐渐减轻。比较WT小鼠,SP-D-/-小鼠AP后相应时间点胰腺病理损伤更重及病理评分显著升高(P<0.05),胰腺中ADM显著增多(P<0.05);胰腺组织中MPO及IL-1β表达显著升高,NF-κB转入核内显著增加(P<0.05)。[结论]SP-D通过抗炎、抗凋亡减轻AP胰腺的损伤,对AP起保护作用。第三部分:表面活性蛋白D影响急性胰腺炎腺泡及胰岛β细胞损伤修复及再生的机制[目的]明确SP-D在AP胰腺腺泡及胰岛β细胞损伤修复及再生中的作用,探讨SP-D影响腺泡及胰岛β细胞损伤修复及再生的机制。[方法]C57BL/6WT和SP-D-/-小鼠各40只,分别随机分为WT-CON(N=8)、SP-D-/--CON(N=8)、WT-AP及SP-D-/--AP,AP组再分为3个亚组即1d、3d、7d,30d各亚组8只。采用蛙皮素诱导小鼠AP模型,AP后测小鼠空腹血糖及糖耐量,各时间点分批剖杀,取胰腺组织。免疫荧光检测腺泡中AMY、SOX9、SP-D、Ki67、NICD、Hesl的表达,观察损伤的腺泡细胞去分化及再分化情况;免疫荧光检测胰岛中Insulin、SP-D、NGN3、Hes1的表达,观察胰岛β细胞去分化及再分化情况。[结果]外分泌方面,较WT小鼠AP相应时间点,SP-D-/-小鼠AP 1d胰腺中SOX9+导管样细胞及ADM显著增多(P<0.05),AP后3d和7d胰腺中SOX9+及ADM减少缓慢;较WT小鼠AP相应时间点,SP-D-/-小鼠AP 1d Ki67+细胞显著增加(P<0.005),但AP 3d和7d Ki67+细胞无显著差异(P>0.05)。较WT小鼠AP,SP-D-/-小鼠AP各时间点胰腺组织中NICD及Hes1的表达显著增加(P<0.05)。内分泌方面,较WT小鼠AP相应时间点,SP-D-/-小鼠AP30d空腹血糖显著升高,糖耐量损伤更重(P<0.05),胰腺组织中NGN3+β细胞显著增加(P<0.05)。较WT小鼠AP1d,WT小鼠AP30d胰腺中NGN3+β细胞显著减少(P<0.05);较SP-D-/-小鼠AP1d,SP-D-/-小鼠AP30d胰腺中NGN3+β细胞未见明显减少(P>0.005)。较WT小鼠AP1d,SP-D-/-小鼠AP1d胰岛中Hes1表达明显减少(P<0.05)。这些结果提示,AP时SP-D缺乏引起持续的Notch活性,导致去分化腺泡细胞及胰岛β细胞再分化减少,从而导致腺泡细胞恢复不良及AP后IGT及DM更严重。[结论]SP-D通过调节Notch活性水平,促进AP后去分化的腺泡及胰岛β细胞再分化,从而有利于AP胰腺内、外分泌细胞损伤修复及再生。