单核细胞趋化因子在卡介苗诱导膀胱局部抗肿瘤免疫反应中的作用及机制

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目的:探讨单核细胞趋化因子(MCP-1)对肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)细胞增殖的作用以及能否增加TIL对膀胱肿瘤细胞的细胞毒性,观察卡介苗(BCG)膀胱灌注治疗后,膀胱肿瘤中单核细胞趋化因子(MCP-1)钟声蛋白样受体(TLR4,TLR2),以及核转录因子κB(NFκB)的表达,进而讨论MCP-1在BCG诱导的膀胱肿瘤的局部抗瘤免疫反应中的具体过程和机制。 方法:用Rosenberg的方法从膀胱癌组织中分离TIL。体外在IL-2和MCP-1作用下培养TIL,用细胞记数法测定细胞增殖。观察在不同浓度的MCP-1的作用下,不同时间相对应的TIL增殖的变化;于体外在IL-2和MCP-1作用下培养TIL作为效应细胞,以膀胱癌细胞系EJ作为靶细胞,用MTT释放实验测定TIL对肿瘤细胞的细胞毒杀伤作用;用MTT法测定不同浓度的MCP-1作用后的TIL细胞毒性的影响。收集膀胱肿瘤电切(TUR)术标本,分别提取标本组织中的总RNA,用MCP-1,TLR4,TLR2,NFκB的寡核苷酸引物进行RT-PCR扩增,产物经琼脂糖凝胶电泳后,用凝胶成像系统检测原发膀胱移行细胞癌标本、正常膀胱黏膜以及BCG灌注治疗后膀胱移行细胞癌复发标本中MCP-1,TLR4,TLR2,NFκB mRNA的表达;用免疫组化的方法测定NFκB(P65)在各标本中的表达。 结果:(1)MCP-1(1ng/ml)作用二周后,可显著增高TIL增殖(第15天)、(P<0.01>,且可加强细胞杀伤率(16.4%)(P<0.01)。 (2) 在TURBT所取标本中,经膀胱BCG灌注治疗后,膀胱移行
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