特异性抗体介导的蜂毒肽对骨肉瘤的抑制作用

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表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)对于多种细胞具有促进增殖和营养作用。EGFR在多种肿瘤细胞内高表达,说明其与这些肿瘤的发生、发展等变化有关。另外,大量研究表明EGFR信号系统与肿瘤的发生和肿瘤耐药性关系密切,并且EGFR的异常变化也是骨肉瘤的显著特点。蜂毒(Beevenom, BV)做为免疫相关疾病治疗制剂已广泛应用,特别是在肿瘤治疗领域其作用十分显著。研究发现,肾癌、肺癌、肝癌、前列腺癌、膀胱癌、乳腺癌以及白血病细胞均可成为BV主要成分蜂毒肽(Melittin)的靶标。Melittin激活PLA2从而发挥细胞毒作用已被公认为BV抗肿瘤的主要作用机制。Melittin通过激活Caspase酶和基质金属蛋白酶,诱导多种肿瘤细胞发生凋亡,从而实现其抗肿瘤作用。现已证明,将Melittin与激素受体、特异性抗体等多种具有导向作用的物质融合表达,可以有效治疗多种肿瘤。本研究将Melittin通过柔性肽与抗EGFRscFv连接,并由大肠杆菌进行表达,制备了融合蛋白antiEGFR/MEL。对表达条件进行了优化,并进行了复性和初步纯化。利用表达的融合蛋白,针对人骨肉瘤细胞进行了体内、外抑瘤实验研究。研究结果表明,含有EGFR单链抗体的重组蛋白antiEGFR/MEL可与OS732细胞有效结合,并定位于OS732细胞膜表面。antiEGFR/MEL能够有效抑制OS732细胞的生长,但对正常细胞L02无明显作用。另外,antiEGFR/MEL抑制OS732细胞生长的现象,呈现明显的时间效应和剂量效应趋势。本研究还利用BALB/c小鼠结合小鼠骨肉瘤细胞S180,建立了实体肉瘤细胞模型,并开展了体内抑瘤实验研究。研究结果表明,antiEGFR/MEL可以抑制S180实体肿瘤生长、延长动物模型生存期、延长动物模型肿瘤倍增时间和肿瘤生长延迟时间。以上结果说明,antiEGFR/MEL具有应用于骨肉瘤生物治疗研究的潜质。
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