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目的:探讨不同时段增生性瘢痕成纤维细胞细胞周期相关基因cyclinE和P27kip1基因及蛋白的表达与成纤维细胞实际所处的细胞周期进行的相关性,为将基因干扰治疗用于增生性瘢痕的防治提供前期研究基础。
方法:以手术切取后低温保存的32例增生性瘢痕组织为材料,根据临床诊断及瘢痕形成的时间分为四个阶段:3个月,六个月,一年及两年的增生性瘢痕,利用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)技术,观察不同阶段增生性瘢痕中cyclinE和P27kip1的mRNA表达情况,用蛋白电泳(Western Blot)技术观察二者的蛋白表达水平,以及用流式细胞术检测各个阶段增生性瘢痕中成纤维细胞的细胞周期情况。
结果:(1)RT-PCR实验结果:随着HS的发展,成纤维细胞中cyclinE的表达强度呈由强至弱的变化。3个月组与6个月组比较差异有统计学意义(P<0.05);6个月组分别与1年组、2年组比较差异有统计学意义(P<0.05);1年组与2年组比较差异无统计学意义(p>0.05)。而P27kip1的表达在增生性瘢痕早期明显低于晚期,3个月组与6个月组比较差异有统计学意义(P<0.05);6个月组分别与1年组、2年组比较差异有统计学意义(P<0.05);1年组与2年组比较差异无统计学意义(p>0.05)。(2)Western blotting实验结果:3个月组、6个月组增生性瘢痕的FB中cyclinE蛋白表达量明显高于1年及2年组,有统计学意义(P<0.05);1年及2年组之间差异无统计学意义(P>0.05)。P27kip1在3个月组、6个月组增生性瘢痕中的蛋白表达量明显低于1年及2年组(P<0.05);1年及2年组之间差异无统计学意义(P>0.05)。(3)流式细胞仪检测结果:3个月组、6个月组增生性瘢痕的成纤维细胞多数处于S期;而1年及2年组的增生性瘢痕的成纤维细胞多处于G0/G1期。
结论:(1)cyclinE在增生性瘢痕的增生期,无论是mRNA水平还是蛋白水平的表达量均是显著增高,其中以3个月组的表达量最高,6个月组次之。(2)增生性瘢痕中P27kip1在3个月组、6个月组时mRNA水平及蛋白水平的表达量显著低于1年及2年组。(3)不同时段增生性瘢痕中的周期调控基因cyclinE、P27kip1 mRNA的表达与最终产物蛋白的表达趋势与成纤维细胞细胞周期的运行基本一致。(4)cyclinE和P27kip1在增生性瘢痕的发生发展中相互拮抗,cyclinE的过表达及低水平的P27kip1是导致成纤维细胞异常增殖分化的原因之一。因此,cyclinE和P27kip1是调控增生性瘢痕处于增生期的重要调控因子,在增生性瘢痕发生发展的早期阶段对这对调控基因进行干扰治疗,有可能会控制增生性瘢痕的发生和发展。