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传染性法氏囊病病毒（Infectious bursal disease virus,IBDV）是引起传染性法氏囊病（Infectious bursal disease,IBD）的病原体,IBD好发于雏鸡,不但能够导致B淋巴细胞凋亡,还能抑制先天性免疫、损伤法氏囊、胸腺和脾脏等免疫器官,导致被感染鸡只永久性免疫缺陷甚至死亡。IBDV导致的免疫抑制往往使得感染鸡只对于其它病原体的易感性提高,如临床上常见的IBDV和新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）等病毒或大肠杆菌等细菌的混合感染病例,给养殖业造成巨大损失,目前仍缺乏关于IBDV感染后如何提高机体对其他病原感染能力的相关分子机制。本研究以IBDV和NDV混合感染、以LPS模拟细菌内毒素与IBDV混合作用为例,从先天性免疫效应角度发现IBDV导致的混合和继发感染相关的内在分子机制,为阐明IBDV继发其它病原感染的分子致病机制提供依据。首先通过观察IBDV和NDV同时感染、IBDV和NDV先后感染、IBDV和LPS同时作用以及IBDV和LPS先后作用时细胞病变情况,再使用荧光定量PCR检测各组病毒复制动态变化。结果表明,IBDV和NDV无论同时感染还是先后感染两种病毒均能同时在DF-1细胞中复制,但IBDV和NDV混合感染时两种病毒复制平台期受NDV控制,使IBDV复制平台期提前。此外,当IBDV和NDV同时感染时,在平台期及平台期前两种病毒之间复制互不干扰,而IBDV和NDV先后感染时,IBDV干扰NDV的复制;混合感染时从平台期开始NDV能够干扰IBDV复制。在LPS作用下,只有当IBDV复制后,LPS的作用能够干扰IBDV的复制。其次,为了研究IBDV和NDV混合感染时对宿主先天性抗病毒通路的影响,进而影响两种病毒复制的机制,研究进一步通过荧光定量PCR法检测不同感染方式下细胞先天性抗病毒通路相关基因的m RNA水平变化,使用Elisa法进一步检测IFN-β蛋白水平变化。结果,当IBDV和NDV同时感染时,细胞先天性抗病毒通路各因子的变化与NDV单独感染组比较相似,在感染早期同时感染组MDA5、OAS表达与NDV感染相似处于激活状态,而MX和NF-κB表达相对于单独感染组显著上调;随后在感染后期IBDV和NDV同时感染时TLR3、MDA5、I干扰素、OAS表达受NDV影响而受到明显的抑制,同时导致更强的IL8表达。当IBDV复制后再感染NDV时,在混合感染的早期,先天性抗病毒通路相对于空白组始终处于抑制状态,TLR3的抑制尤其显著,随后先天性抗病毒通路被激活,特别是IRF3、MX、OAS的表达在感染后期混合感染组显著高于单独感染组。IFN-β蛋白水平变化趋势和先天性抗病毒通路m RNA水平变化趋势一致,并在40hpi时先后感染组IFN-β蛋白水平显著高于IBDV感染组,但与NDV感染组差异不显著。同时,在先后感染组的早期MDA5、IFN-α、OAS表达显著高于NDV单独感染组,随后先后感染组的I型干扰素以及干扰素诱导表达基因的表达量始终高于NDV单独感染组。综上表明,IBDV和NDV混合感染时抑制宿主细胞先天性抗病毒通路并有利于两种病毒的共存;IBDV和NDV同时感染时,NDV可通过先天性抗病毒通路干扰IBDV的复制,而IBDV复制后再感染NDV时,IBDV可通过先天性抗病毒通路干扰NDV的复制,而在感染后期NDV通过上调IFN-β表达干扰IBDV的复制。然后,为了研究IBDV和NDV混合感染时对凋亡通路的影响,进而影响两种病毒复制的机制,通过荧光定量PCR检测IBDV和NDV混合感染时凋亡通路相关基因的m RNA水平变化,并使用MTT法进行进一步的验证。结果,当IBDV和NDV同时感染时,Bax与Bcl-2比值在感染早期相对于单独感染要低,并发现NDV对凋亡通路的影响更大。而IBDV和NDV先后感染时,相对于单独感染组而言,混合感染组的凋亡通路m RNA水平为先受到抑制,后得到增强,与MTT法对细胞活力的检测结果一致,此外,先后感染组的效应caspase显著高于NDV单独感染组,而与IBDV单独感染组相似。综上表明,IBDV和NDV混合感染在感染早期抑制细胞凋亡,从而有利于两种病毒的复制共存,但在感染后期促进凋亡而增加细胞损伤;NDV能够通过凋亡通路干扰IBDV的复制;IBDV和NDV先后感染时IBDV能通过凋亡通路干扰NDV复制。最后,对LPS干扰IBDV复制的机制进行了进一步的研究,将LPS作用于感染了IBDV的DF-1细胞,通过荧光定量PCR检测先天性抗病毒通路变化。结果显示,LPS作用于IBDV感染的DF-1细胞后,I型干扰素相关的抗病毒通路始终保持被激活的状态,是LPS干扰IBDV复制的关键。综上所述,IBDV和NDV混合感染时两种病毒均能同时在DF-1细胞中复制,而IBDV和NDV混合感染时在感染早期抑制宿主细胞先天性抗病毒通路以及抑制凋亡通路有利于两种病毒的共存和复制,在感染后期促进凋亡增加细胞损伤。当IBDV和NDV同时感染时,NDV可通过先天性抗病通路以及凋亡通路干扰IBDV的复制。而当IBDV复制后再感染NDV时,IBDV可通过先天性抗病毒通路以及凋亡通路干扰NDV的复制,而NDV能够在感染后期上调IFN-β表达干扰IBDV的复制。当LPS作用于感染IBDV的DF-1细胞时导致先天性抗病毒通路持续上调从而干扰IBDV复制。