绝经后骨质疏松患者CD14+单核细胞miR-503的表达与甲基化的研究

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第一章绝经后骨质疏松患者CD14+单核细胞microRNA表达谱的研究目的:研究绝经后骨质疏松患者外周血CD14+单核细胞中miRNA表达谱的变化。方法:收集26例确诊的绝经后骨质疏松患者和25例健康对照者。应用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,免疫磁珠法分选CD14+单核细胞。应用miRNA微阵列技术,分析绝经后骨质疏松患者外周血CD14+单核细胞miRNA表达谱的变化。通过实时定量PCR方法验证表达明显变化的miRNA。结果:(1)用芯片检测绝经后骨质疏松症患者CD14+PBMCs中miRNA表达谱变化,发现差异表达的miRNA有5个,表达明显下调的有3个:hsa-miR-503, hsa-miR-218, hsa-miR-618;表达明显上调的有2个:hsa-miR-133a, hsa-miR-107。其中以hsa-miR-503表达下调最明显。(2)对明显差异表达的miRNA进一步行实时定量RT-PCR验证,发现定量PCR结果与芯片结果一致,表明miRNA芯片结果可靠。结论:与健康对照相比,绝经后骨质疏松症患者CD14+PBMCs中hsa-miR-503, hsa-miR-218, hsa-miR-618表达明显降低,而hsa-miR-133a, hsa-miR-107表达明显升高,其中以hsa-miR-503表达下调最明显。第二章绝经后骨质疏松患者miR-503启动子甲基化的研究目的:研究绝经后骨质疏松患者外周血CD14+单核细胞中miR-503启动子甲基化水平,探讨miR-503在绝经后骨质疏松患者中表达下调的机制。方法:收集26例确诊的绝经后骨质疏松患者和25例健康对照者。利用亚硫酸氢钠测序法,分析CD14+PMBCs中miR-503启动子区片段(-1897to-1469bp)甲基化水平。结果:(1)绝经后骨质疏松患者的12个CpG位点(-1830,-1796,-1759,-1756,-1741,-1719,-1689,-1661,-1590,-1581,-1530,-1509)平均甲基化水平(0.8±0.2)高于健康绝经后女性(0.51±0.16),差异有统计学意义(P<0.01)。(2)绝经后骨质疏松患者和绝经后健康女性的CD14+单核细胞中miR-503表达水平与启动子区CpG平均甲基化水平呈负相关(r=-0.942,p<0.001)。结论:(1)绝经后骨质疏松患者miR-503启动子区平均甲基化水平高于正常对照者。(2)绝经后骨质疏松患者和正常对照者CD14+PMBCs中miR-503表达水平与启动子区CpG平均甲基化水平呈负相关。
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