目的:牙胚发育涉及牙源性上皮和间充质间复杂的相互作用。其中,间充质细胞由中脑和后脑部位的部分神经嵴细胞迁移分化而来。转录因子Sox9在神经嵴细胞的发育及迁移分化过程中起重要作用,而牙胚发育过程中的间充质正是神经嵴来源的,因此我们推测在小鼠磨牙胚发育过程中有Sox9的表达,那么Sox9在小鼠磨胚发育过程中的生物学功能是什么?本文的研究目的:研究Sox9在小鼠磨牙胚发育中的生物学功能:(1)检测转录因子Sox9在小鼠磨牙发育过程中的时空表达特征;(2)采用体外小鼠牙胚器官培养为研究模型,探讨Sox9对小鼠磨牙胚发育的影响以及Sox9对牙胚发育的生物学作用;(3)通过体外mDPCs(小鼠牙乳头细胞)培养,探讨Sox9对mDPCs发育的影响,进一步探讨Sox9在牙胚发育中的生物学功能。方法:(1)利用免疫组化和原位杂交技术检测不同发育时期的小鼠磨牙胚,对Sox9在牙胚发育中的表达进行观察和分析;(2)构建体外小鼠磨牙胚器官培养研究模型,并利用RNAi(RNAinterference,RNA干扰)技术,抑制其Sox9基因的表达。采用HE染色技术检测上述牙胚器官的形态变化;(3)构建体外mDPCs培养研究模型,并利用RNAi抑制mDPCS中Sox9基因的表达。通过CCK8染色检测上述mDPCs的增殖能力的变化。结果:(1)通过对不同发育时期(E13.5-E18.5)的小鼠下颌第一磨牙进行Sox9抗体免疫组化和原位杂交检测,观察发现:在小鼠磨牙胚发育早期,随着牙胚的发育,Sox9的表达逐渐由唇侧间充质细胞(E13.5-E14.5),进入牙乳头细胞(E16.5)以及牙髓组织(E18.5);此外,Sox9强烈表达于牙胚发育早期的成釉器上皮细胞。(2)通过对照组和实验组(抑制Sox9表达)体外培养的小鼠牙胚的冰冻切片进行的HE染色检测,发现在培养2天后,实验组牙胚发育至蕾状晚期,而对照组牙胚发育至帽状期。(3)通过检测对照组和实验组(抑制Sox9表达)体外培养的mDPCs,发现实验组mDPCs增殖能力下降。结论:(1)Sox9在小鼠磨牙胚发育过程中的表达具有时空特异性,提示Sox9可能参与小鼠磨牙胚的发育。(2)在体外培养的小鼠磨牙胚器官模型中,抑制Sox9基因的表达会导致牙胚发育迟缓,提示Sox9基因在牙胚发育过程中起重要作用。(3)在体外培养的mDPCs中,抑制Sox9基因的表达,细胞增殖能力下降,提示Sox9对维持mDPCs的增殖能力有重要作用。