本研究通过低能N离子注入处理大肠杆菌野生型菌株MC4100A，利用其蚀刻效应和诱变效应将外源质粒直接导入菌体中、根据Tat转运系统相关基因的缺失型菌株分裂后分离功能的异常，tat突变型菌株对SDS的敏感性以及在M9培养基中生长性能为指标，筛选Tat蛋白质转运系统受阻的突变菌株。 　　经低能N离子注入处理后，转入质粒p8760，并筛选到了7株与MC4100A相比有很大差异的转化子，这些转化子细胞呈链状排列，丧失了细胞分裂后分离的能力；2﹪SDS对其有一定的杀伤性；在厌氧状态下，失去了以甘油为碳源和TMAO为电子受体的生长能力。 　　通过十二烷基磺酸钠(SDS)、紫外线(UV)、三黄片(SHP)、反复冻融4种物化方法对大肠杆菌MC4100A/p8760菌株进行质粒消除。摸索了DNA在非损伤条件下的消除规律，并获得了几株质粒消除的菌株。同时用M9培养基培养和镜检两种方法检验了质粒消除后菌株的基本特性。结果表明，质粒消除没有改变突变菌株的性状。 　　现将编码tat基因的质粒p8737转入质粒已消除的菌株中，进行互补检测。结果表明，导入质粒p8737后，菌株的形态没有恢复，且在M9培养基中仍不能生长，说明不能互补。 　　为了构建基因文库，确定突变菌株的具体突变位点。提取MC4100A菌株的核DNA；测定基因组DNA的纯度；选用限制性内切酶MobⅠ进行酶切，电泳，观察酶切效果。