【摘 要】
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目的:本研究旨在探究枝孢样枝孢霉分别以皮下和尾静脉注射感染健康小鼠,对皮肤和肺脏的致病性,及皮肤和肺组织中的模式识别受体和细胞因子的变化,研究不同感染途径引起的先天性免疫应答。方法:对C57BL/6小鼠皮下注射枝孢样枝孢霉孢子悬液(2×107CFU/m L)0.1m L,采集感染后7 d和14 d皮肤组织样本进行病理组织学检查,采集对照组0 d和感染后7 d皮肤组织样本进行免疫荧光染色,采集对照组
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目的:本研究旨在探究枝孢样枝孢霉分别以皮下和尾静脉注射感染健康小鼠,对皮肤和肺脏的致病性,及皮肤和肺组织中的模式识别受体和细胞因子的变化,研究不同感染途径引起的先天性免疫应答。方法:对C57BL/6小鼠皮下注射枝孢样枝孢霉孢子悬液(2×10~7CFU/m L)0.1m L,采集感染后7 d和14 d皮肤组织样本进行病理组织学检查,采集对照组0 d和感染后7 d皮肤组织样本进行免疫荧光染色,采集对照组0 d以及感染后12 h、1 d、3 d、7 d和14 d皮肤组织样本进行RT-q PCR测定细胞因子及模式识别受体表达。对KM小鼠尾静脉注射枝孢样枝孢霉孢子悬液(2×10~7CFU/m L)0.2 m L,采集感染后1 d、2 d、3 d、5 d、9 d、14 d和21 d肺组织样本进行病理组织学检查,采集感染后2 d、5 d、9 d和14 d肺组织样本测定真菌负荷量,采集对照组0 d和感染后5 d肺组织样本进行免疫荧光染色,采样对照组0 d以及感染后2 d、5 d、9 d和14 d肺组织样本进行RT-q PCR测定模式识别受体及细胞因子表达。结果:小鼠皮下注射枝孢样枝孢霉后形成皮下脓肿,脓肿灶内有大量炎症细胞浸润,而皮肤表皮和真皮层结构中有较少炎症细胞浸润,少量树突状细胞、巨噬细胞和中性粒细胞募集。模式识别受体中Dectin-1在感染14 d,TLR-2在感染3 d,TLR-4在感染后12 h基因相对表达显著增加(p<0.01)。促炎细胞因子IFN-γ、IL-12、IL-23、IL-6、IL-4、IL-17F在感染后12 h,IL-1β和IL-17A在感染后7 d,均表现基因表达显著增加(p<0.01),其中以IL-6、IL-1β和IL-17A相对表达倍数增加较高。抑炎细胞因子TGF-β在感染后7 d基因表达显著增加(p<0.01)。尾静脉注射枝孢样枝孢霉感染小鼠后,小鼠肺脏中有大量真菌孢子定植,且血管充血、出血严重,肺组织中可见大量炎症细胞浸润,有较多中性粒细胞、巨噬细胞和树突状细胞募集,及较高ICAM-1分泌。模式识别受体中Dectin-1在感染后基因表达显著减少(p<0.001),TLR-2和TLR-4分别在感染后5 d和14 d基因表达显著增加(p<0.01)。促炎细胞因子IFN-γ、IL-13和IL-1β在感染后2 d和5 d,IL-4、IL-23和IL-22在感染后5 d,IL-12、TNF-α和IL-17F在感染后14 d,TNF-α和IL-17A在感染后2 d,均表现基因表达显著增加(p<0.01),其中以IL-4、IL-13、IL-12、IL-23、IL-1β和IL-22相对表达倍数增加较高。抑炎细胞因子TGF-β和IL-10在感染后5 d基因相对表达显著(p<0.01)。结论:小鼠皮下感染枝孢样枝孢霉引起皮下脓肿,真菌孢子和菌丝只定植于脓肿内,皮肤组织表现较弱的炎症反应,Toll受体识别真菌孢子并诱导体内先天性和适应性免疫应答,Th17信号通路参与机体免疫应答。小鼠尾静脉感染枝孢样枝孢霉引起肺脏严重感染,肺组织中有较多真菌孢子和菌丝定植,至感染后5 d得到控制,Toll样受体识别真菌并诱导体内先天性和适应性免疫反应,Th2和Th17信号通路参与机体免疫应答。
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