miR-339在胃癌发病过程中的功能研究

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第一部分:检测miR-339在胃癌患者血清及胃癌组织中的变化及分析与临床资料的相关性目的:探讨miR-339在胃癌患者血清及胃癌组织中的变化及分析与临床资料的相关性。方法:收集2012年1月-2016年8月共115例胃癌患者血清、胃癌组织、癌旁组织及115例健康者的血清;整理115例胃癌患者及115健康者的性别、年龄等相关临床资料。PCR法检测分析胃癌患者血清中miR-339的水平同健康患者血清中miR-339的水平差异;胃癌患者胃癌组织中miR-339的水平同癌旁组织中miR-339的水平的差异;分析胃癌患者血清中miR-339的水平同性别、年龄、肿瘤大小、淋巴转移、远处转移、肿瘤分化程度及肿瘤分期的相关性。结果:胃癌患者血清中miR-339的水平较健康者血清中miR-339的水平明显降低;胃癌组织中miR-339的水平较癌旁组织中miR-339的水平明显降低;不同性别、年龄、肿瘤大小、远处转移的胃癌患者血清中miR-339的水平无明显差异,不同肿瘤分化程度、肿瘤分期、淋巴转移情况的胃癌患者血清中miR-339的水平有明显差异。结论:胃癌患者血清中miR-339的水平较健康者明显降低,胃癌组织中miR-339的水平较癌旁组织明显降低;血清中miR-339的水平同性别、年龄、肿瘤大小无明显相关性;同淋巴转移、肿瘤分化程度、肿瘤分期呈负相关。第二部分:探讨miR-339在胃癌细胞系SGC7901增殖和凋亡中的作用及机制目的:探讨miR-339在胃癌细胞系SGC7901细胞增殖和凋亡中的作用及可能的机制。方法:过表达或沉默胃癌细胞系SGC7901细胞中miR-339,PCR法检测SGC7901细胞内 BCL-2,BCL-XL,C-MYC,IL-6,TNF-α 和 KC 基因表达情况;Western blot法检测SGC7901细胞内BCL-2,BCL-XL,p-jnk和p-Akt蛋白表达情况;光镜下观察SGC7901细胞细胞克隆形成能力;MTT法和Brdu法检测SGC7901细胞细胞增殖能力;流式细胞仪检测SGC7901细胞凋亡情况。结果:沉默 miR-339 后 SGC7901 细胞内 BCL-2,BCL-XL,C-MYC,IL-6,TNF-α和KC基因水平及BCL-2,BCL-XL,p-jnk和p-Akt蛋白水平明显升高;过表达 miR-339 后 SGC7901 细胞内 BCL-2,BCL-XL,C-MYC,IL-6,TNF-α 和 KC基因水平及BCL-2,BCL-XL,p-jnk和p-Akt蛋白水平明显降低;沉默miR-339后SGC7901细胞克隆形成能力、增殖能力明显增强,细胞凋亡明显减少;过表达miR-339后SGC7901细胞克隆形成能力、增殖能力明显减弱,细胞凋亡明显增加。结论:miR-339可能通过抑制SGC7901细胞内p-jnk、p-Akt信号通路的活化,调控Bcl-2、BCL-xl、c-myc、IL-6等基因的功能,影响SGC7901细胞的增殖和凋亡。第三部分:探讨miR-339对胃癌细胞系SGC7901在裸鼠皮下成瘤中的作用目的:探讨miR-339对胃癌细胞系SGC7901在裸鼠皮下成瘤中的作用。方法:将24裸鼠随机分为4组:沉默miR-339组(shmiR-339组)、沉默miR-339溶剂对照组(shNC组)、过表达miR-339组(miR-339组)、过表达miR-339溶剂对照组(NC组)。分别将过表达或沉默胃癌细胞系SGC7901细胞注射到裸鼠皮下,观察4周后SGC7901细胞在裸鼠皮下瘤体的大小。结果:沉默miR-339后SGC7901细胞注射到裸鼠皮下瘤体明显增大,过表达miR-339后SGC7901细胞注射到裸鼠皮下瘤体明显减小。结论:沉默miR-339后胃癌细胞系SGC7901在裸鼠皮下成瘤能力增加;过表达miR-339可以明显抑制胃癌细胞系SGC7901在裸鼠皮下的成瘤能力。
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