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背景：宫颈癌已成为女性近年来常见恶性肿瘤之一,是由人类乳头瘤病毒(HPV)引起,在全世界呈发展中国家的宫颈癌发病率较高。每年约有二十多万女性死于此病,我国每年新增病例为13万以上。预防与治疗宫颈癌是医学界研究的重要任务。RNA干扰(RNAi)是近年来研究肿瘤治疗的一个新领域,是通过与靶基因同源的双链RNA诱导的特异转录后基因沉默现象。其机制是双链RNA被特异的核酸酶降解,产生干扰RNA(siRNA),这些siRNA与同源的靶RNA互补结合,特异性酶会降解靶RNA而至产生基因沉默现象。Survivin是凋亡抑制蛋白家族的新成员,具有肿瘤特异性,只表达于肿瘤组织,由于与细胞的生存相关而称为生存素。Survivin与细胞凋亡的关系是通过外源性凋亡途径和内源性凋亡途径进行。通过这些途径能将细胞色素C从线粒体释放,这是细胞凋亡的关键步骤。释放出的的细胞色素C在dATP存在下能与凋亡相关因子1(Apaf-1)结合,使其形成多聚体,并促使caspase-9(半胱氨酸天冬酰胺酶-9)与其结合形成凋亡小体,caspase-9被激活,从而进一步激活其它的caspase如caspase-3等,诱导细胞凋亡Survivin的作用机制主要是通过抑制Caspasc-3和Caspasc-7的活性；或者通过P21间接抑制Caspase。目的：本研究采用RNA干扰技术,针对人survivin基因mRNA序列构建1个siRNA重组质粒,转染人宫颈癌Hela细胞,观察转染后细胞生长形态变化及其对细胞survivin蛋白表达、survivin mRNA表达、细胞凋亡及细胞内caspase-3酶活性的变化来分析该过程导致的细胞生物学特征的变化。从而为临床肿瘤的治疗提供重要的实验基础。方法：合成survivin基因的有短发夹结构的DNA序列,克隆到RNA干扰表达载体pcdna6.2质粒上,构建pcdna6.2-siRNA(+)和pcdna6.2-siRNA(-)重组质粒,同时设空白对照。脂质体介导转染Hela细胞后,提取总RNA及蛋白质。应用实时荧光定量PCR检测survivin mRNA,并应用Western blot技术检测蛋白质表达水平的变化。采用细胞生长曲线和MTT法检测Hela细胞增殖能力的改变；采用流式细胞术实验观察survivin下调后对Hela细胞凋亡生物学行为的影响,最后通过Braford法测定Caspase3蛋白浓度的变化。结果：1.成功构建针对Survivin基因的RNA干扰真核表达载体,转染Hela细胞后影响细胞的正常生长并且能够抑制Survivin mRNA及蛋白质的正常表达。pcDNA6.2-G W/EmGFP-siR(+)组对Survivin mRNA的相对表达量在48h干扰效果最佳。2.实时荧光定量PCR、Western blot结果表明转染pcdna6.2-siRNA(+)质粒后,Hela细胞中Survivin mRNA和蛋白表达水平显著下调。3.细胞增殖能力测试结果表明转染Survivin干扰质粒后Hela细胞增殖能力受到明显抑制。4.流式细胞术结果显示实验组细胞凋亡率约为11.44%,而阴性对照组细胞凋亡率约为4.05%。Caspase3蛋白浓度检测显示Survivin基因沉默可升高其活性。结论：本研究成功构建了针对Survivin基因的RNA干扰质粒,并证实其在宫颈癌Hela细胞中可下调Survivin mRNA及蛋白的表达。Survivin基因沉默可以有效抑制人宫颈癌Hela细胞体外恶性增殖并促进凋亡。Survivin可以作为宫颈癌患者治疗的一个新靶点。本研究为利用RNA干扰技术探索Survivin基因在宫颈癌中的治疗中奠定了实验基础。