益气健脾抗癌方联合卡培他滨对于结肠癌的干预机制研究

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目的:围绕结肠癌患者脾虚本质,梳理文献,总结临床实践经验,寻找益气健脾抗癌方治疗结肠癌的理论依据,观察其临床疗效。通过动物实验的方法,阐述益气健脾抗癌方对CT26WT荷瘤裸鼠的抗炎作用及机制,为临床采用益气健脾法治疗结肠癌提供理论支撑。材料与方法:一、文献及临床研究:基于文献研究及相关实验文献记载,探究结肠癌发生进展的主要病机以及中药联合化疗在本病治疗方面的应用及优势;分析、总结辽宁中医药大学附属医院肿瘤科(简称科室)治疗结肠癌的经验、用药规律,形成扶正驱邪的方药,以用于实验研究。二、实验研究:本实验研究选用SPF级BALB/C无胸腺裸鼠作为初始研究对象。首先将6周龄,体质量为(20±5g)的雌性裸鼠20只、雄性20只于腋窝皮下注射CT26WT细胞悬液各0.2ml用以制备结肠癌荷瘤裸鼠模型,以制备成功的结肠癌荷瘤裸鼠(40只)模型作为研究对象,随机(随机数字法)分为4组,分别为:模型组、益气健脾抗癌方组、卡培他滨组、益气健脾抗癌方联合卡培他滨组。分别对4组进行相应的药物干预实验,连续干预15天后进行样本采集,实验开始前及结束前分别称重并观察裸鼠一般状态。实验结束时取结肠癌荷瘤裸鼠全血进行血液常规检测(blood routine examination);剥离完整瘤体组织并称重,取部分瘤体组织,采用免疫印迹法检测肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)、磷酸化型人核转录因子肽(phosphorylation nuclear factor kappa-B,p-NF-κBp65)及人核转录因子肽(nuclear factor kappa-B,NF-κBp65)等相关蛋白表达,采用SPSS26.0对数据进行统计分析,显著性差异设定为P<0.05。结果:一、文献及临床研究1.脾脏起着维持人体正常生理功能运行的重要作用。元气之充足,皆由脾胃之气无所伤,而后能滋养元气。如脾虚则运化无权,水谷和精微不能得到运化,导致维持机体正常生理功能的营养物质缺失,进而元气亦不能重充,而诸病之所由生也。脾虚亦为肿瘤致病之本,最终正气亏损不能抵御邪气而致癌毒侵犯、痰湿瘀毒内生,所以肿瘤的发生以本虚标实为主。2.科室多年来根据扶正祛邪治疗原则组方治疗结肠癌,扶正以四君子汤为底方健脾益气,配以莪术、生牡蛎、姜黄、仙鹤草、半枝莲等解毒祛邪及软坚散结药物以驱邪,并配伍柴胡、黄芩、半夏组成小柴胡汤与四君子汤合方,取调畅气机之意以顺畅衔接扶正与驱邪药物的联合应用,形成益气健脾抗癌方应用至今。本研究实验部分用益气健脾抗癌方作为中药治疗。二、实验研究1.荷瘤裸鼠体质量:卡培他滨(化疗)干预组结肠癌荷瘤裸鼠体质量较实验开始前有明显下降趋势,差异有统计学意义(P<0.05),其它各组结肠癌荷瘤裸鼠体质量较实验开始前无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05)。2.血液常规指标的影响:与模型组相比较,各组间荷瘤裸鼠外周血中血红蛋白含量及红细胞数目均无统计学差异(P>0.05);与模型组相比较,各组间小鼠外周血中白细胞数量显著降低(P<0.01);与益气健脾抗癌方组比较,卡培他滨组及益气健脾抗癌方联合卡培他滨组小鼠外周血白细胞数量显著减少(P<0.01),差异有统计学意义;与卡培他滨组比较,益气健脾抗癌方联合卡培他滨组小鼠外周血白细胞数量显著增加(P<0.01),差异有统计学意义。3.荷瘤裸鼠瘤重及抑瘤率:与模型组相比较,各给药组荷瘤裸鼠瘤重均减轻(P<0.05);益气健脾抗癌方组抑瘤率为36.5%,卡培他滨组抑瘤率为40.6%,益气健脾抗癌方联合卡培他滨组抑瘤率为47.4%。4.TNF-α、p-NF-κBp65、NF-κB p65蛋白表达水平:与模型组相较,各给药组TNF-α、p-NF-κBp65、NF-κB p65蛋白表达水平均显著降低(P<0.01);与益气健脾抗癌方组相较,益气健脾抗癌方联合卡培他滨组TNF-α、p-NF-κBp65、NF-κB p65蛋白表达水平均显著降低(P<0.01);与卡培他滨组比较,益气健脾抗癌方联合卡培他滨组TNF-α、p-NF-κBp65、NF-κB p65蛋白表达水平均显著降低(P<0.01),差异有统计学意义。结论:1.通过对中医文献整理和临床实践总结可知,脾虚并导致正气虚弱与癌毒并存是恶性结肠癌的重要病机,科室的益气健脾抗癌方可使患者临床获益。2.益气健脾抗癌方可一定程度干预肿瘤生长并缓解结肠癌荷瘤裸鼠卡培他滨治疗导致的体重减轻等副作用,可以减轻实验鼠化疗导致的白细胞减少。3.益气健脾抗癌方联合卡培他滨干预组抑瘤率优于益气健脾抗癌方组和卡培他滨组。免疫印迹结果表明:益气健脾抗癌方联合卡培他滨能够下调结肠癌荷瘤裸鼠瘤组织中TNF-α、p-NF-κBp65、NF-κB p65蛋白的表达水平,其作用机制可能是通过抑制NF-κB信号通路的过度活化,下调TNF-α、p-NF-κBp65、NF-κB p65蛋白的表达水平,抑制瘤体内炎症反应,从而实现抑制肿瘤发展的作用。
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