【摘 要】
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目的体内外分别构建稳定高效的exosomes修复SD大鼠AMI模型及exosomes修复原代培养的心肌细胞缺血缺氧损伤模型,明确exosomes对AMI的治疗作用,找出exosomes修复AMI过程中起关
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目的体内外分别构建稳定高效的exosomes修复SD大鼠AMI模型及exosomes修复原代培养的心肌细胞缺血缺氧损伤模型,明确exosomes对AMI的治疗作用,找出exosomes修复AMI过程中起关键作用的miRNAs,探讨其修复机制,为exosomes用于临床心肌梗死病人的治疗提供实验依据。方法通过蔗糖重水层密度梯度离心法与分子筛超滤法相结合的方法分离浓缩hucMSC-exosomes,用纳米颗粒分析仪进行鉴定;采用结扎左冠状动脉前降支构建体内SD大鼠AMI模型,经超声心动图和western blot验证;在分离获得hucMSC-exosomes以及成功构建体内外缺氧模型的基础上,通过给予hucMSC-exosomes治疗,分别采用超声心动图及western blot检测hucMSC-exosomes体内外对心肌的影响;通过荧光定量PCR确定相关microRNA在exosomes中含量,通过生物信息学分析进行靶基因预测,转染miR-92b mimics及inhibitor,验证Smad7在mRNA及蛋白水平变化,探讨hucMSC-exosomes对AMI损伤修复过程中microRNA可能的分子机制。结果成功分离了hucMSC-exosomes及构建体内外exosomes修复心肌细胞缺氧损伤模型。荧光定量PCR检测出exosomes中miR-92b含量较高;exosomes修复的心肌梗死大鼠中,血清mi R-92b上调;同时,心肌组织中的miR-92b也上调。Exosomes治疗及转染miR-92b mimics后心肌细胞Smad7上调。结论在exosomes修复心肌梗死过程中,exosomes中富含的miR-92b可能是通过调节Smad7进而促进心功能恢复。
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