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目的：通过斯氏狸殖吸虫病患者血清识别斯氏狸殖吸虫成虫抗原,研究特异性识别抗原的生物学特性并对PsMt 01蛋白在斯氏狸殖吸虫不同虫期的表达进行研究,以及对斯氏狸殖吸虫成虫表膜和肠相关抗原进行研究,为筛选出对于并殖吸虫病的预防及免疫诊断具有应用价值的抗原分子提供理论依据。方法：(1)斯氏狸殖吸虫成虫可溶性抗原经SDS-PAGE、2DE、感染血清的免疫印迹识别特异性的蛋白,采用De Novo肽测序对蛋白肽段测序,分析感染血清识别蛋白的特性。(2)提取斯氏狸殖吸虫囊蚴总RNA，经RT-PCR扩增及T/A克隆后测定其核苷酸序列(PsMt 01蛋白)并进行序列查询与比对。再分别提取斯氏狸殖吸虫虫卵、幼虫、童虫和成虫总RNA,经RT-PCR, RTQ-PCR分析PsMt 01蛋白在不同虫期的表达。(3)斯氏狸殖吸虫成虫制备成15μm的冰冻切片,并殖吸虫患者血清识别斯氏狸殖吸虫成虫特异性抗原,采用免疫金标记和免疫酶标记检测技术对抗原进行定位,激光共聚焦扫描显微镜技术进行半定量分析以及免疫透射电镜对其细微结构的观察。三维重建技术对斯氏狸殖吸虫成虫肠腔进行三维重建。结果：(1)斯氏狸殖吸虫成虫可溶性抗原SDS-PAGE电泳后,经考马斯亮蓝染色可见22条蛋白带,其中主带8条,分子量在13-64kDa,未见72kDa以上的蛋白带。Western-blotting显示有20条显色的蛋白带,主带分子量分别是17、20、22、28、35和64kDa。2-DE分离出斯氏狸殖吸虫成虫可溶性抗原约200多个蛋白点,分子质量位于17～130kDa之间,绝大部分蛋白点位于pI 3.10～7.14,少数分布于pI 8.78～9.85,而在pI7.14～8.78之间,几乎未见蛋白点。Western blotting分析有10个蛋白点能被并殖吸虫病感染者的混合血清识别,大部分为小分子量,分子量间于17～72kDa之间,主要分布在偏酸性区域。参照1-De和2-DE结果选取A、B、C三个蛋白点作De Novo肽测序。(2)结果显示A点蛋白与6种并殖吸虫相关蛋白匹配,其中与卫氏并殖吸虫的一新型蛋白westerpain-1/10匹配分值最高,B点蛋白与5种并殖吸虫相关蛋白匹配,其中与卫氏并殖吸虫cysteine proteinase匹配值最高；C点蛋白没有相关蛋白与之相匹配。(3)T/A克隆后测定其核苷酸序列(PsMt 01蛋白)经同源性比对属于半胱氨酸白蛋白酶,RTQ-PCR结果显示PsMt 01蛋白在从囊蚴期到成虫期都有不同程度的表达,虫卵期没有表达。最高的表达量在0周到7周的幼虫期和童虫期,成虫期的表达量较少。(4)并殖吸虫患者血清识别的斯氏狸殖吸虫成虫抗原定位于虫体的表膜和肠腔,表膜抗原半定量分析平均灰度值为80.65,肠腔抗原半定量分析平均灰度值为71.26,电镜下可见胶体金附着于肠腔和表膜的双层结构。结论：(1)De Novo肽测序分析特异抗原属于半胱氨酸蛋白酶家族,金标记检测显示可来自虫体表膜及分泌排泄物。(2)PsMt 01蛋白主要表达在斯氏狸殖吸虫虫体发育的早期,在侵入宿主的早期发挥作用。(3)肺吸虫患者血清识别的斯氏狸殖吸虫成虫抗原都为表膜相关抗原和肠相关抗原,因此与并殖吸虫病免疫诊断相关的诊断抗原为虫体表膜和肠上皮产生的相关蛋白