【摘 要】
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泛素化在细胞生命活动的许多进程中发挥着至关重要的作用,其中包括激素信号和极端环境信号的感受和传导。脱落酸(ABA)不仅可以调控植物的生长发育,而且可以作为触发植物对逆境胁迫应答反应的传递体,参与调控植物对逆境胁迫的应答。目前,逆境胁迫及ABA信号传导中泛素化相关基因功能的研究取得很大进展,这方面的研究对阐明植物响应逆境胁迫的分子机制具有非常重要的意义。本论文利用生物化学、分子生物学和遗传学分析等方
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泛素化在细胞生命活动的许多进程中发挥着至关重要的作用,其中包括激素信号和极端环境信号的感受和传导。脱落酸(ABA)不仅可以调控植物的生长发育,而且可以作为触发植物对逆境胁迫应答反应的传递体,参与调控植物对逆境胁迫的应答。目前,逆境胁迫及ABA信号传导中泛素化相关基因功能的研究取得很大进展,这方面的研究对阐明植物响应逆境胁迫的分子机制具有非常重要的意义。本论文利用生物化学、分子生物学和遗传学分析等方法,通过对E3泛素连接酶SRAR1蛋白的生理生化功能及其参与激素ABA信号途径中的调控机制进行了系统的分析及全面的阐述,为SRAR1作为抗旱基因在基因工程中的应用提供了理论依据。研究表明,拟南芥SRAR1的表达能够被脱水,氯化钠和ABA处理强烈诱导。这种由脱水诱导的SRAR1的表达在ABA合成突变体(aba2-1)和ABA不敏感突变体(abi1-1 and abi2-1)中明显减少。蛋白质体外泛素化实验证明,SRAR1具有E3泛素连接酶活性。通过对环指结构域的点突变,发现环指蛋白结构域的完整性对E3泛素连接酶的活性是必需的。SRAR1主要定位在细胞核中,仅有少量的蛋白定位在细胞核外组织。SRAR1-promoter::GUS分析表明,SRAR1在根的维管组织和气孔的保卫细胞中能够高表达。通过对拟南芥野生型植物、SRAR1过表达转基因植物及其T-DNA插入突变体srar1植物的比较研究,发现它们对ABA、盐、干旱处理的敏感性发生了改变。与野生型和突变体srar1相比,35S::SRAR1过表达植物的种子萌发和萌发后的生长对ABA和盐处理更加敏感。35S::SRAR1过表达植物的叶片气孔对ABA处理更敏感,干旱处理时水分蒸腾相对较少,因此它的干旱耐受能力较强。而35S::SRAR1-mut过表达植物与野生型相比,它的种子萌发和萌发后的生长对盐的反应相似,没有过敏感的表型。另外,我们的结果也发现SRAR1的3’非翻译区能产生大约21bp的small RNA,它的合成仅依赖于hen1和hyl1的途径,可能是一个新型的small RNA。基因芯片对35S::SRAR1过表达植物与野生型植物中的基因表达进行了对比分析,发现SRAR1的过表达对大量胁迫相关基因的表达是至关重要的。综合以上的研究结果,我们认为SRAR1参与了胁迫响应的ABA信号应答,是ABA信号途径的一个正调节因子。它可能作为干旱耐受基因工程的候选基因,提高农作物的耐旱节水性。通过这个研究,我们希望为基因工程提高作物的抗旱能力提供一定的理论依据。
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