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目的本课题利用四氯化碳来诱导内质网应激,建立小鼠急性肝损伤模型,进而较深入探讨内质网应激诱导小鼠急性肝损伤的分子机制,以及二至丸对这一过程的保护作用及可能的作用机制,为二至丸在临床上预防和治疗肝脏疾病提供理论依据。方法1.二至丸的制备:称取墨旱莲和提前炮制好的酒女贞子粉末适量放入烧锅内,加水浸泡、煎煮两次、过滤、收集并合并滤液,适量浓缩。按照中国药典的检测方法对其进行质量评价。2.CCl4诱导小鼠内质网应激所致急性肝损伤模型的建立:将50只昆明种雄性小鼠随机分为正常对照组10只和CCl4模型组40只。模型组按0.1ml/10g给药体积腹腔注射10%CCl4（豆油稀释）,空白组注射等体积生理盐水。分别在注射后16 h、24 h、48 h、72 h处死动物并取材,计算肝、脾指数;检测血清中的谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和丙二醛（MDA）水平之变化;小鼠肝脏组织采用HE染色法观察其病理学变化,TUNEL法检测肝组织细胞凋亡情况,免疫组织化学法和Western Blot法检测内质网应激标志性蛋白CHOP和GRP78表达情况。3.内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）诱导肝损伤的分子机制,及二至丸对其保护作用的研究:50只昆明种雄性小鼠随机分为正常对照组、模型组和二至丸低、中、高剂量组（140、280、560mg/ml）,二至丸各剂量组按0.1ml/10g给药体积灌胃给药,1次/d,连续14 d,正常对照组和模型组灌胃等体积生理盐水。末次给药8 h后,除正常组外,其余各组小鼠均按0.1ml/10 g给药体积腹腔注射10%CCl4溶液,24 h后处死,计算肝、脾指数。眼球取血检测血清谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和丙二醛（MDA）水平的变化;采用HE染色观察肝组织病理学改变;TUNEL法观察肝组织凋亡情况;免疫组织化学法和Western Blot法检测ERS标志性蛋白CHOP和GRP78的表达情况。结果1.制得的二至丸黑褐色,气微,微苦。其外观、性状符合《中国药典》2010版标准,二至丸的齐墩果酸含量达到《中国药典》2010版标准。2.与正常对照组相比,模型组小鼠血清中ALT、AST和MDA水平均有所上升,在16 h达到顶峰（P<0.01）,16 h后有所下降,并逐渐恢复至接近正常水平;模型组中SOD和GSH-PX活性先降低,24 h后逐渐恢复;模型组肝脏指数显著增高（P<0.01）,脾脏指数与之相反,并且均24 h后逐渐恢复。肝组织HE染色结果显示:模型组小鼠中肝细胞肿大,胞质疏松,出现明显的片状坏死;TUNEL检测结果显示:模型组小鼠肝细胞大量凋亡,凋亡指数明显升高（P<0.01）,免疫组化结果显示,与正常对照组相比,CHOP和GRP78表达量显著升高（P<0.01）,并在24 h达到最高值。3.与模型组相比,二至丸各剂量组均能够显著改善血清学指标（P<0.01或P<0.05）,减小肝脏变性、坏死范围,减轻肝脏损伤程度,小鼠肝脏、脾脏指数均有明显变化（P<0.01或P<0.05）;TUNEL结果显示二至丸给药组的肝细胞凋亡指数明显下降（P<0.01或P<0.05）;免疫组化及Western Blot结果显示ERS标志性因子CHOP和GRP78表达水平显著下降（P<0.01或P<0.05）。结论本研究建立了CCl4诱导的小鼠内质网应激所致急性肝损伤模型,造模条件为0.1ml/10g的10%CCl4腹腔注射,诱导时间为24h;二至丸对该模型小鼠急性肝损伤具有显著的保护作用,其机制可能与二至丸减轻氧化应激损伤,抑制细胞凋亡,下调ERS相关蛋白CHOP和CRP78的表达有关。