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目的:探讨雷公藤内酯醇(Triptolide,Tri)对大鼠急性脊髓损伤的保护作用,为应用Tri治疗急性脊髓损伤提供一定的理论基础及实验依据,为临床治疗急性脊髓损伤提供一种新的思路及方法。 方法:60只SPF级SD大鼠随机分为4组,分别为Tri组(18只)、阳性对照组甲基强的松龙(Methylprednisolone,MP)组(18只)、单纯损伤组(18只)、空白对照组(6只)。空白对照组大鼠不做任何处理,其它三组大鼠通过摸肋骨方法定位大鼠T11胸椎,暴露大鼠脊髓后以Nystrom法压迫脊髓造模。造模成功后,按实验设计分别给药:空白对照组不做任何处理;Tri组大鼠术后立即行Tri腹腔注射,注射量为0.4mg/kg,以后每日注射1次,最长持续7天;MP组大鼠术后立即行大剂量MP腹腔注射,注射量为30mg/kg,8小时重复一次,以后每日注射1次,最长持续3天;单纯损伤组术后立即行生理盐水腹腔注射,注射量为3ml/kg,以后每日注射1次,最长持续7天。术后第3天,取各组大鼠各3只,行SCI大鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能检测。Tri组、MP组及单纯损伤组三组大鼠在术后1、3、5、7、14天各时间点取各组大鼠3只,先做BBB评分及斜板实验,然后处死大鼠取伤处脊髓组织做HE染色及生长相关蛋白43(Growth Associated Protein-43,GAP-43)免疫组化检测,同时酶联免疫吸附试验(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)法检测大鼠血清中抑炎因子白细胞介素10 (Interleukin-1,IL-10)及炎症因子肿瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)的含量变化。空白对照组大鼠术后1、3、5、7天各时间点只做BBB评分及斜板实验不处死,术后第14天行BBB评分及斜板实验后处死取材、取血行相关检查。 结果:(1)BBB评分及斜板试验结果:术后1、3、5、7天各时间点各手术组BBB评分及斜板试验结果较空白对照组低(P<0.05);各手术组间差异无统计学意义(P>0.05);术后14天,各手术组BBB评分及斜板试验较空白对照组低(P<0.05);各手术组间比较,Tri组大鼠BBB评分及斜板试验结果较MP组及单纯损伤组高(P<0.05);MP组与单纯损伤组结果无显著差别(P>0.05)。(2)GAP-43免疫组化显示:术后1天各手术组GAP-43免疫组化IOD值较空白对照组高(P<0.05);各手术组间差异无统计学意义(P>0.05);术后3、5、7、14天各时间点各手术组GAP-43免疫组化IOD值较空白对照组高(P<0.05);各手术组间比较,Tri组大鼠GAP-43免疫组化IOD值较MP组及单纯损伤组高(P<0.05);MP组与单纯损伤组结果无显著差别(P>0.05);(3) HE染色显示:空白对照组脊髓未见明显组织学变化。术后1天损伤部位有出血淤血,神经元出现肿胀,少数神经元的染色质变稀疏;术后3、5天相应部位损伤加重,部分神经细胞出现形态改变,坏死区域有胶质细胞增生;术后7天大鼠脊髓细胞水肿达到高峰,肿胀非常明显,部分神经元出现核固缩,胞体皱缩,细胞外间隙增多,部分出现核的解离;术后14天损伤部位有胶质瘢痕形成,胶质细胞大量增生,大鼠的神经元数量减少,但是存活的神经元包膜逐渐清晰,肿胀好转。HE染色显示伤后1、3、5、7天各时间点,三组大鼠之间病理表现无明显差异;术后14天,Tri组损伤肿胀及出现核固缩或解离的神经元数量少于MP组及单纯损伤组,MP组与单纯损伤组之间无显著差异;术后14天Tri组胶质细胞数量少于MP组及单纯损伤组,MP组与单纯损伤组之间无显著差异;术后14天Tri组大鼠脊髓组织结构较MP组与单纯损伤组清晰;(4)血清IL-10检测:术后1d,各手术组血清IL-10较空白对照组高(P<0.05);各手术组间比较,MP组大鼠血清IL-10较Tri组及单纯损伤组高(P<0.05);Tri组与单纯损伤组结果无显著差别(P>0.05);术后3、5、7、14天,各手术组血清IL-10较空白对照组高(P<0.05);各手术组间比较,Tri组及MP组血清IL-10较单纯损伤组高(P<0.05);Tri组与MP组结果无显著差别(P>0.05);(5)血清TNF-α检测:术后1d,各手术组血清TNF-α较空白对照组高(P<0.05);各手术组间比较,MP组大鼠血清TNF-α较Tri组及单纯损伤组低(P<0.05);Tri组与单纯损伤组结果无显著差别(P>0.05);术后3、5、7、14天,各手术组血清TNF-α较空白对照组高(P<0.05);各手术组间比较,Tri组及MP组血清TNF-α较单纯损伤组低(P<0.05);Tri组与MP组结果无显著差别(P>0.05);(6)腹腔巨噬细胞吞噬指数检测:术后第3天,各组大鼠腹腔巨噬细胞吞噬指数由高到低依次为:Tri组、单纯损伤组、空白对照组、MP组,结果有统计学意义(P<0.05)。 结论:雷公藤内酯醇对大鼠急性脊髓损伤具有一定的保护作用,其保护作用可能是通过调控增加脊髓损伤后大鼠机体 IL-10 的表达及降低 TNF-α的表达、增强脊髓损伤后大鼠体内巨噬细胞活性,从而发挥脊髓保护作用的,但其具体保护机制还需进一步研究。