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目的:通过检测食管鳞癌(esophageal squamous cell cancer,ESCC)患者肿瘤组织及癌旁组织中桥接整合因子-1(bridging integrator-1,Bin1)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、基质金属蛋白酶-9(matrix metal proteinase-9,MMP-9)的表达情况,分析ESCC中Bin1、VEGF、MMP-9的表达与患者临床病理特征的关系,探讨Bin1在肿瘤血管形成和侵袭转移中的作用。构建携带Bin1基因的病毒载体,筛选Bin1低表达的ESCC细胞,以慢病毒为载体进行基因转染,应用体外实验研究Bin1对ESCC细胞株KYSE30侵袭和迁移能力的影响,并探讨其作用机制。方法:1收集2014年1月至2015年1月期间河北医科大学第四医院胸外科手术切除的72例ESCC患者的肿瘤组织和癌旁组织,将每例标本分为2份,1份标本迅速置于液氮中,后于-80℃超低温冰箱中贮存以备提取RNA;另1份以4%甲醛溶液固定以备制作蜡块,用于免疫组化染色。2应用免疫组化和RT-PCR方法检测肿瘤组织和癌旁组织中Bin1和VEGF、MMP-9的蛋白表达和基因表达水平,分析其表达情况之间的关系,分析食管鳞癌组织中Bin1和VEGF、MMP-9表达与患者临床病理特征的关系。3采用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantificational real-time polymerase chainreaction,q RT-PCR)方法检测Bin1在TE13、TE1、KYSE30、Eca109和Yes-2五种人食管鳞癌细胞株中的表达情况,筛选出Bin1低表达的食管鳞癌细胞KYSE30。构建携带Bin1基因的慢病毒载体,以病毒转染的方式将Bin1基因转入KYSE30细胞(Bin1+组),并分别设置空载体组(Bin1-组)和空白对照组(Control组),经RT-PCR和Western blot方法鉴定,获得稳定转染Bin1的细胞。4利用细胞划痕实验和Transwell侵袭实验检测各组细胞的迁移能力和侵袭能力的变化;Western blot实验检测Bin1对细胞迁移相关蛋白MMP-9和E钙粘蛋白(E-cadherin,E-cad)的表达水平,探讨Bin1影响食管鳞癌细胞侵袭转移机制。结果:1.与癌旁组织相比,ESCC组织中Bin1 m RNA表达水平和蛋白阳性表达率显著降低(0.17±0.12 vs.0.33±0.18,38.89%vs.80.56%,P<0.05);VEGF、MMP-9 m RNA表达水平和蛋白阳性表达率显著升高(0.41±0.19 vs.0.28±0.18,68.05%vs.45.83%,P<0.05)和(0.40±0.14 vs.0.25±0.15,55.56%vs.33.33%,P<0.05)。在基因和蛋白表达水平上ESCC肿瘤组织和癌旁组织中Bin1与VEGF、MMP-9呈显著负相关关系(P<0.05);2 Bin1和VEGF、MMP-9的表达水平与ESCC患者的肿瘤分化程度、浸润深度、TNM分期、淋巴结转移相关,与患者性别、年龄无关;3.检测TE13、TE1、KYSE30、Eca109和Yes-2五种人食管鳞癌细胞株Bin1 m RNA的表达水平,筛选出Bin1表达水平最低的KYSE30细胞,用于后续实验。与Bin1-组和Control组相比,Bin1+组KYSE30细胞中Bin1基因和蛋白表达水平显著升高(P<0.05),说明Bin1已成功转入KYSE30细胞中。以G418筛选的方式获得稳转的Bin1+细胞和Bin1-细胞;4细胞划痕实验结果显示,划痕12h和24h后,Bin1+组细胞迁移距离为(25.4±2.5vs.58.6±3.7)um,Bin1-组细胞迁移距离为(58.1±5.3 vs.92.4±4.4)um,Control组细胞迁移距离为(60.2±4.1 vs.89.6±5.7)um。Bin1+组迁移距离在12h及24h后与Bin1-组和Control组相比均明显缩短,有统计学意义(P<0.05),Bin1-组和Control组相比无统计学意义(P>0.05),说明Bin1能够影响KYSE30细胞的迁移能力。Transwell实验显示,Bin1+组、Bin1-组、Control组穿膜细胞数分别为51.50±3.15、125.00±4.25、131.00±4.37,Bin1+组穿膜细胞数较Bin1-组和Control组均显著降低(P<0.05),Bin1-组和Control组穿膜细胞数无统计学差异(P>0.05),说明Bin1基因转染后能够抑制KYSE30细胞的侵袭能力。Western blot检测细胞中与迁移侵袭相关的蛋白MMP-9和E-cad,结果显示,与Bin1-组和Control组相比,Bin1+组MMP-9表达较Bin1-组和Control组均显著降低(P<0.05),E-cad表达显著升高(P<0.05),说明Bin1通过影响MMP-9和E-cad的表达降低KYSE30细胞迁移侵袭能力。结论:1 ESCC肿瘤组织中Bin1表达水平降低,VEGF、MMP-9表达水平增高,Bin1和VEGF、MMP-9的表达呈显著负相关关系,与患者肿瘤分化程度、浸润深度、TNM分期、淋巴结转移密切相关。说明ESCC肿瘤组织中Bin1低表达与ESCC侵袭转移等恶性行为相关。2体外实验通过慢病毒转染建立稳定表达Bin1的ESCC细胞KYSE30,Bin1转染后KYSE30细胞的迁移和侵袭能力显著降低,其机制可能与Bin1影响细胞迁移侵袭相关蛋白MMP-9和E-cad表达变化相关。