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目的1.检测武汉人群中慢性HCV感染患者基因分型，分析基因分型分布及其临床意义；2.扩增HCV1b型感染患者的HCV NS3区并进行测序，分析HCV NS3功能区氨基酸变异和CD8~+T细胞表位内外的变异；3.比较中国武汉人群和德国人群HLA频率分布差异。检测HCV1b型感染患者HLA分型，并比较分析武汉HCV患者人群与武汉健康人群HLA频率分布；4.分析HCV1b病毒株序列变异与宿主HLA-I限制性CD8~+T细胞表位变异的相关性，并针对NS3序列预测HLA-I限制性CD8~+T细胞表位。方法1.收集227例武汉慢性HCV感染患者血清和全血，抽提血清中HCV RNA，采用型特异性引物扩增法对HCV RNA进行基因分型，分析武汉人群中HCV基因型别分布，并分析HCV1b型的临床意义。2.采用巢式PCR对HCV1b基因型的HCV NS3区进行扩增并测序，采用软件将HCV1b型患者的HCV NS3区序列进行序列比，分析HCV NS3功能区的变异和CD8~+T细胞表位内外的变异。3. HLA频率分布网站中比较中国武汉人群和德国人群的HLA频率分布。采用型特异性引物PCR法检测中国武汉HCV1b型患者相应的HLA-I（A-和B-位点）等位基因，与武汉健康人群HLA-I等位基因频率相比较。4.采用ALIGN、DNAMAN等软件分析武汉HCV1b感染患者中不同HLA-I限制性的CD8~+T细胞表位的变异频率。采用网络软件预测HCV1b型NS3区序列的HLA-I限制性CD8~+T细胞表位。结果1.227份武汉慢性丙肝患者中HCV基因1b型126例（63.6%），其他HCV基因型72例（36.4%），表明在我国慢性丙肝患者HCV主要型别是1b型。比较39例HCV1b型和19例HCV其他基因型别患者肝功能，发现HCV1b型感染者较其他HCV基因型感染者更容易出现肝功能异常，提示HCV1b型较其他HCV基因型更易造成肝脏损伤。2.对30条HCV NS3区全长序列进行分析，发现决定HCV功能的氨基酸序列很难发生变异，表明HCV NS3功能区的氨基酸序列相对保守。而且HCV NS3区CD8~+T细胞表位内的氨基酸突变频率明显大于表位外（p<0.05，有统计学意义），提示CD8~+T细胞的免疫压力是导致HCV NS3变异的重要原因之一。3.比较中国武汉人群和德国人群的HLA-A和HLA-B基因型频率分布，发现中国武汉人群中HLA-A02/11/24和HLA-B13/15/46频率较高。而且中国武汉和德国人群的HLA基因型频率分布有明显不同，在武汉人群中分布频率较高的HLA-A11、HLA-B46基因型频率在德国人群中明显较低；而在德国人群中分布频率较高的HLA-A01、HLA-A03、HLA-B07、HLA-B08基因型频率在中国武汉人群中较低。分析本研究中135例HCV患者的HLA-A基因型频率和134例HCV患者的HLA-B基因型频率，发现跟中国武汉健康人群的HLA基因型频率基本一致。4.从群体水平上分析HCV1b型患者HLA-I限制性的HCV NS3区CD8~+T细胞表位突变，发现两个HLA-A02阳性的HCV NS3区CD8~+T细胞表位（NS31169-1177和NS31443-1451）突变频率，明显高于HLA-A02阴性的HCV NS3区CD8~+T细胞表位突变频率，有统计学意义（P<0.05）。将预测的HCV1b型患者中HLA-I限制性的HCVNS3区CD8~+T细胞表位与30条HCV NS3全长序列联合分析，发现四个预测的HCVNS3区CD8~+T细胞表位的变异与HLA-I限制性CD8~+T细胞免疫压力可能有关。结论1.武汉人群中主要的HCV病毒株型别是HCV1b型，并且HCV1b型较其他HCV基因型更易造成肝脏损伤。2.决定HCV功能的NS3功能区氨基酸序列很难发生变异，而HCV NS3区CD8+T细胞表位内的氨基酸突变频率明显大于CD8~+T细胞表位外的氨基酸突变频率，提示CD8~+T细胞的免疫压力是导致HCV NS3变异的重要原因之一。3.武汉和德国人群的HLA基因频率有明显不同，在武汉人群中HLA频率较高比如HLA-A11、HLA-B46在德国人群中明显较低。武汉人群中频率较高的HLA-I限制性的HCV CD8~+T细胞表位突变频率则相对较高。4.两个NS3区CD8~+T细胞表位（NS31169-1177和NS31443-1451）跟HLA-A02相关，表明HCV NS3区CD8~+T细胞表位突变受到宿主HLA等位基因限制。本研究的创新点1.发现武汉和德国人群的HLA基因频率有明显不同，武汉人群中频率较高的HLA-I限制性的HCV CD8~+T细胞表位突变频率相对较高，为找出最佳的HCV抗原序列并研制预防性和治疗性疫苗提供了科学基础。2.国内既往多项研究集中在HCV的异质性和HCV CD8~+T细胞表位预测，仅少数研究HLA-I类等位基因与HCV变异的关系。本研究的意义探讨HCV在CD8~+T细胞免疫压力下演化适应过程，测定HLA-I限制性HCV NS3区CD8~+T细胞表位序列多态性，明确不同人群中HCV在CD8~+T细胞免疫压力下演变规律，为寻找保护性CD8~+T细胞抗原表位和研制基于T细胞HCV疫苗提供科学基础。