【摘 要】
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输卵管是卵子运输、储存、精子获能、受精和早期胚胎发育的重要部位。输卵管上皮细胞支持胚胎的发育并为胚胎早期发育提供理想的生理生化环境,但相比于其他体细胞,输卵管上皮细胞体外增殖分裂能力较弱,无法作为种质资源细胞库的种子细胞长期保存,也不能满足其他实验研究与应用的需求。因此,本论文以蒙古羊为研究对象,通过酶消化法培养蒙古羊输卵管上皮细胞,采用脂质体转染法将端粒逆转录酶基因（TERT）转入蒙古羊输卵管上
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输卵管是卵子运输、储存、精子获能、受精和早期胚胎发育的重要部位。输卵管上皮细胞支持胚胎的发育并为胚胎早期发育提供理想的生理生化环境,但相比于其他体细胞,输卵管上皮细胞体外增殖分裂能力较弱,无法作为种质资源细胞库的种子细胞长期保存,也不能满足其他实验研究与应用的需求。因此,本论文以蒙古羊为研究对象,通过酶消化法培养蒙古羊输卵管上皮细胞,采用脂质体转染法将端粒逆转录酶基因（TERT）转入蒙古羊输卵管上皮细胞,经G418抗性筛选,建立端粒逆转录酶基因修饰的蒙古羊输卵管上皮细胞系（TERT-SOECs）,并进行相关鉴定。主要研究结果如下:1.建立了蒙古羊输卵管上皮细胞（SOECs）系。采集健康蒙古羊输卵管组织,胰蛋白酶消化法分离、纯化了蒙古羊原代输卵管上皮细胞,培养细胞呈现出上皮细胞典型的鹅卵石形状,并稳定表达上皮细胞特异性标记物角蛋白18（CK18）。传代培养发现该细胞冻存、复苏后仍能保留较好的生长特性。2.建立了端粒逆转录酶基因修饰的蒙古羊输卵管上皮细胞系（TERT-SOECs）。利用脂质体转染法将p CI-neo-h TERT质粒转入蒙古羊输卵管上皮细胞（SOECs）,经G418筛选得到端粒逆转录酶基因修饰的蒙古羊输卵管上皮细胞系（TERT-SOECs）,琼脂糖凝胶电泳检测证实端粒逆转录酶基因（TERT）成功转入蒙古羊输卵管上皮细胞,目前可传至P15,并稳定表达上皮细胞特异性标记物角蛋白18（CK18）。P5端粒逆转录酶基因修饰的蒙古羊输卵管上皮细胞（TERT-SOECs）体外培养的细胞倍增时间平均为46.61 h,P3、P5蒙古羊输卵管上皮细胞（SOECs）体外培养的细胞倍增时间平均分别为51.86 h、65.03 h。端粒逆转录酶修饰后的蒙古羊输卵管上皮细胞（TERT-SOECs）体外增殖分裂能力比修饰前SOECs明显提高,达到了预期的效果。综上所述,本研究建立的端粒逆转录酶基因修饰的蒙古羊输卵管上皮细胞系（TERT-SOECs）具有较强的体外增殖分裂能力,并依然保持了输卵管上皮细胞特有的生物学特性,为其作为种质资源细胞库种子细胞及后续实验研究奠定了必要的基础。
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