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血管系统的形成始于胚胎中胚层形成过程中其部分细胞分化为血管内皮前体细胞。这些细胞经过进一步增殖、分化,并通过移行、聚集、极化形成最初的血管网络,该过程称为血管发生(vasculogenesis)。伴随胚胎的生长发育,这一初始血管网络通过被统称为新血管生成(angiogenesis)的过程而改建与生长,最终形成由多级血管组成的功能血管系统。与此同时,各级血管在血管壁细胞(周细胞、血管平滑肌细胞等)生成过程中成熟稳定。因此,血管系统形成的整个过程实际上是血管内皮细胞与其周围细胞相互作用的过程,血管内皮细胞是血管生成的中心细胞。为了探讨血管内皮细胞分化机制,我们从发育至三体节的鸡胚中克隆一些血管内皮(前体)细胞特异表达的基因。我选择新近在小鼠新发现的血管内皮锌指转录因子-1(Vezf1)的同源基因进行研究,该基因被报道在早龄鼠胚的血管内皮及其前体细胞中特异性表达。期望对鸡Vezf1基因的功能分析,进一步揭示血管内皮细胞分化及血管形成的细胞与分子机制。我们首次采用RNAi技术在鸡胚上对Vezf1的功能进行研究,并通过免疫磁珠的方法分离鸡血管内皮祖细胞研究Vezf1对其分化的影响。我们针对Vezf1mRNA序列,构建Vezf 1的干扰载体pPRIME-CMV-GFP-cVEZF1-microRNA,通过三质粒系统在293T细胞中包装成病毒颗粒,用病毒体外感染鸡血管内皮祖细胞和感染早期活体鸡胚,取得如下结果:1、成功构建鸡Vezf1 RNAi系统pPRIME-CMV-GFP-cVEZF1-microRNA重组质粒,在鸡胚细胞中检测其基因沉默效率达75%左右。2、对不同时期的早期鸡胚做Whole-mount原位杂交,分析了cVezf1 mRNA的动态表达情况。3、制备了兔抗鸡VEZF1多克隆抗体,经Elisa检测抗体滴度达10000以上。4、用Dynal免疫磁珠法成功分离原代鸡内皮祖细胞,纯度达90%以上。5、双色免疫组化证实了VEZF1在鸡内皮细胞中表达。6、鸡胚活体抑制Vezf1证明其在血管形成和心脏发育过程中发挥重要作用。