【摘 要】
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研究背景:肺癌是全球范围内高发的恶性肿瘤,也是我国发病率及死亡人数最高的肿瘤。其中非小细胞型肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）是肺癌重要的分型,主要包括肺鳞癌及肺腺癌。由ErbB-1基因编码的表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）在 NSCLC 的发生发展中起到非常重要的作用:40%的肺腺癌样本中可以检测
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研究背景:肺癌是全球范围内高发的恶性肿瘤,也是我国发病率及死亡人数最高的肿瘤。其中非小细胞型肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）是肺癌重要的分型,主要包括肺鳞癌及肺腺癌。由ErbB-1基因编码的表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）在 NSCLC 的发生发展中起到非常重要的作用:40%的肺腺癌样本中可以检测到EGFR突变,而30%肺鳞癌样本中EGFR发生基因扩增和表达升高,提示EGFR可能是肺癌的关键驱动基因之一。Hedgehog（Hh）信号通路是调控机体发育的重要信号通路,而Hh信号紊乱与多种肿瘤的发生发展和耐药密切相关。有文献认为Hh信号与EGFR信号通路可以协同作用,促进肿瘤的发展。动物实验和临床试验发现,联用Hh信号抑制剂和EGFR抑制剂能有效抑制肿瘤的生长,说明Hh信号与EGFR信号存在协同作用和交互调控,但详细的分子机制还有待研究。研究目的:本研究将从Hh/PTCH1信号对EGFR蛋白质稳定性和活性调控入手,探索Hh信号与EGFR信号在受体水平的调控机制,建立新的Hh/PTCH1/EGFR信号轴。1.阐明Hh/PTCH1信号对EGFR蛋白稳定性和活性的调控作用;2.探索Hh/PTCH1调控EGFR蛋白稳定性和活性的机制;3.讨论Hh/PTCH1/EGFR信号轴在非小细胞肺癌中的生理意义。研究方法:1.在293T细胞中过表达PTCH1,观察其对EGFR/HER2蛋白表达水平的变化,检测EGFR/HER2的mRNA水平变化,验证其是否通过转录调控;使用蛋白酶体抑制剂及溶酶体抑制剂处理细胞,研究EGFR/HER2的降解途径;外源性Shh及EGF刺激细胞,检测对PTCH调控EGFR蛋白稳定性及活性的影响;2.免疫共沉淀检测PTCH与EGFR/HER2之间的相互作用及EGFR泛素化水平变化,构建EGFR分段质粒,研究PTCH与EGFR相互作用机制;3.肺腺癌细胞中过表达PTCH,观察其对EGFR/HER2蛋白表达水平的变化,在肺鳞癌临床组织样本中检测EGFR、PTCH表达情况。研究结果:1.PTCH1可以结合EGFR/HER2,Hh配体可以诱导PTCH1调控EGFR/HER2的蛋白稳定性和活性;2.PTCH1介导EGFR的泛素化修饰,并促进EGFR通过溶酶体降解;3.肺癌细胞中Shh与PTCH1共同作用可以促进EGFR降解,肺癌组织样本中也观察到EGFR与PTCH1的表达水平相反。研究结论:PTCH1可以结合EGFR/HER2。在Hh配体存在的条件下,PTCH1可以介导EGFR的泛素化修饰,并促进EGFR/HER2进入溶酶体降解。该过程在非小细胞肺癌细胞中可能发挥了重要作用。
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