毕赤酵母木糖代谢缺陷工程菌株构建及其应用

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木糖作为木糖醇原料和功能性食品添加剂,其市场需求越来越大。木糖生产的主要原料来自玉米芯和农作物秸秆,由于水解液含有多种有机酸、糖类等,使得木糖纯化工艺较复杂,因此,如何简单快速纯化木糖是制备木糖的关键技术。本研究构建了一株木糖代谢缺陷的毕赤酵母,以期实现用微生物利用玉米芯水解液的营养成分,实现木糖纯化和副产物增值的双重目的。主要研究成果如下:1、研究了毕赤酵母生孢条件,结果表明最适毕赤酵母生孢培养基成分为10g/L乙酸钠,6 g/L氯化钾,10 g/L葡萄糖,1 mL/L微量元素,20 g/L琼脂,28℃培养箱中培养7天后其生孢率能达到72%。2、经过生孢后的菌泥于3%蜗牛酶30℃处理2 h,58℃水浴12 min后获得了单倍体菌株。3、采用同源重组的方法敲除了木糖还原酶基因xyl1,获得了木糖代谢缺陷菌株HM,该菌株的木糖发酵能力已丧失。4、研究了时间、温度以及硫酸浓度等多个因素对玉米芯水解的影响,得出最适酸水解玉米芯条件为:0.5%的硫酸浓度在85℃下水解48 h左右,还原糖得率约30%左右。5、将毕赤酵母木糖缺陷型菌株HM接入到玉米芯水解液中发酵培养,在未添加其他营养成分的条件下,能够利用玉米芯水解产生的葡萄糖良好生长;相对于野生型来说,不能利用除葡萄糖之外的还原糖,而野生型菌株在消耗完葡糖糖之后,仍能利用剩余的还原糖进行生长。
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